【摘 要】
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目的:构建人谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)基因的真核表达载体,转染A549细胞,实现其真核表达。方法:以本室保存的重组质粒(pMAL-C2x-GSTP1)为模板;根据GSTP1全基因组序列设计GST
【机 构】
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郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业病学教研室,郑州大学第一附属医院信息科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目30571552;教育部“211重点工程”项目肿瘤与生物子项目;郑州市2006年度科技发展计划(攻关计划)19-153
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目的:构建人谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)基因的真核表达载体,转染A549细胞,实现其真核表达。方法:以本室保存的重组质粒(pMAL-C2x-GSTP1)为模板;根据GSTP1全基因组序列设计GSTP1PCR引物,扩增GSTP1片段;限制性内切酶酶切PCR产物和pcDNA3.0空质粒,T4DNA连接酶连接酶切产物,重组质粒转化E.coliDH5α;提取质粒经酶切、PCR和序列测定后,用PrimerPremier5.0进行序列分析。测序正确的重组质粒和空质粒用脂质体转染法分别转染A549细胞,经G418筛选,获得阳性克隆,运用RT-PCR、WesternBlot等技术进行鉴定,同时观察细胞的生长变化。结果:质粒酶切电泳和特异PCR均可见0.63kb的目的基因片段,测序结果与GenBank中人GSTP1序列一致,基因登录号:BC010915。成功转染A549细胞,实现表达,获得GSTP1蛋白。结论:成功构建pcDNA3.0-GSTP1真核表达细胞系,为进一步研究其在解毒致癌原、预防肺癌发生及其与职业性肺癌的关系奠定了基础。
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