抗人VEGF165单链抗体的构建与表达

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目的 为降低鼠源抗体对人体的免疫原性,构建表达厂VmD11链抗体。方法 用overlap PCR构建出单链抗体的基因,克隆入表达载体pKpL—3a,在大肠杆菌pop2136中表达,采用抗原结合ELISA和竞争抑制ELISA测定活性。结果经SDS-PAGE检测,诱导后的细菌表达了26kD的蛋白;Western Blot证实该蛋白为表达的单链抗体。经变性、复性后,该单链抗体可特异结合人VEGF165抗原,并与VmD11具有相同的抗原结合位点。结论成功构建和表达了抗人VEGF165单链抗体,可望进一步应用于肿瘤复发转移的诊治研究。
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