【摘 要】
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目的:构建人短链胸腺基质淋巴生成紊(short isoform thymic stromal lymphopoietin,sfTSLP)启动子全长及其长度不等片段的萤光素酶报告质粒,以确定启动子活性区域并预测功能
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院儿科,江苏南京,210029
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目的:构建人短链胸腺基质淋巴生成紊(short isoform thymic stromal lymphopoietin,sfTSLP)启动子全长及其长度不等片段的萤光素酶报告质粒,以确定启动子活性区域并预测功能性转录因子结合位点.方法:使用按基因组序列设计的引物,通过PCR分离人sfTSLP启动子片段,并将之插入萤光素酶报告基因载体pGL3-basic中.通过步移缺失构建其截短片段,通过双萤光素酶报告基因系统测定所有启动子缺失克隆在HEK-293细胞中的活性,并使用生物信息学手段预测其潜在的转录结合位点.结果:经菌液PCR、双酶切、测序,成功构建了人sfrSLP启动子及其截短片段萤光素酶报告质粒,并确定其启动子活性区域位于5'侧翼区-200~+25 nt区域内,且可能含有SP1/SP3、SPI1/SPIB、TCF3、ETS1等转录因子结合位点.结论:首次对人sfTSLP启动子区进行了研究,初步确定了其启动子活性区域及可能的转录因子结合位点,为更进一步的研究指明了方向.
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