长链非编码RNA FLJ37505对膀胱癌细胞增殖和迁移影响的作用机制

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目的

检测膀胱癌组织及细胞株中长链非编码RNA(lncRNA)FLJ37505的表达,分析FLJ37505对膀胱癌细胞增殖和迁移影响的作用机制。

方法

实时荧光定量PCR(qPCR)分析63例膀胱癌和癌旁组织(来自2018年1月至2019年3月苏州大学附属第二医院泌尿外科膀胱癌手术切除的标本)和膀胱癌细胞株(T24、J82、5637、BIU-87和UM-UC-3,均购自上海生命科学院细胞所)中FLJ37505的相对表达。将FLJ37505相对表达最少的膀胱癌细胞株根据随机数字法分为对照组(转染空白质粒)和FLJ37505组(转染载有FLJ37505序列的质粒)。MTS法和划痕实验分别检测上调FLJ37505的表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FLJ37505的靶基因。双荧光素酶报告基因系统检测FLJ37505与靶基因的结合。qPCR和Western印迹分别检测上调FLJ37505对靶基因表达的影响。

结果

与癌旁组织相比,FLJ37505在膀胱癌组织表达较低[(4.90±0.79)比(0.89±0.28),P<0.05]。与人正常膀胱上皮细胞相比,FLJ37505在膀胱癌细胞株表达较低(P<0.05),其中FLJ37505在UM-UC-3细胞中的表达最低(P<0.01)。与对照组相比,FLJ37505组UM-UC-3细胞中FLJ37505表达较高[(0.79±0.04)比(9.92±1.17),P<0.01]。与对照组相比,FLJ37505组UM-UC-3细胞的增殖能力和迁移能力均被抑制(均P<0.01)。生物信息学显示,FLJ37505的靶基因是miR-203a-3p,miR-203a-3p的靶基因是二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)。双荧光素酶报告基因系统显示FLJ37505可互补结合miR-203a-3p(P<0.01),miR-203a-3p可互补结合INPP4B mRNA(P<0.01)。与对照组相比,FLJ37505组UM-UC-3细胞中miR-203a-3p的表达较低[(1.00±0.05)比(0.20±0.02),P<0.01],INPP4B在mRNA和蛋白水平的表达均明显增加(均P<0.01)。

结论

膀胱癌组织和膀胱癌细胞中FLJ37505的表达较低,上调FLJ37505可显著抑制膀胱癌UM-UC-3细胞的增殖能力和迁移能力,其作用机制可能是通过吸附miR-203a-3p进而上调INPP4B基因的表达。

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