【摘 要】
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目的:在肺上皮细胞模型中探讨IL-8是否对MUC5B的转录和合成产生影响,并探讨其是否通过JAK2/STAT6信号通路调节黏蛋白MUC5B分泌.方法:(1)体外培养人肺上皮细胞(HBE135-E6E7),无血清培养24h后分为不同浓度组IL-8(20ng/ml、40ng/ml、60ng/ml、80ng/ml、160ng/ml)、不同时间组(6h、12h、24h、48h),用ELISA测得各组MUC5B蛋白含量.(2)HBE135-E6E7无血清培养24h,以JAK2抑制剂AG490和MUC5B抑制剂NAC
【机 构】
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南华大学衡阳医学院附属第二医院呼吸与危重症医学科,湖南省衡阳市 421001
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目的:在肺上皮细胞模型中探讨IL-8是否对MUC5B的转录和合成产生影响,并探讨其是否通过JAK2/STAT6信号通路调节黏蛋白MUC5B分泌.方法:(1)体外培养人肺上皮细胞(HBE135-E6E7),无血清培养24h后分为不同浓度组IL-8(20ng/ml、40ng/ml、60ng/ml、80ng/ml、160ng/ml)、不同时间组(6h、12h、24h、48h),用ELISA测得各组MUC5B蛋白含量.(2)HBE135-E6E7无血清培养24h,以JAK2抑制剂AG490和MUC5B抑制剂NAC(乙酰半胱氨酸)为处理因素,分为以下六组:A组:空白对照组;B组:IL-8最适浓度组(160ng/ml);C组:IL-8+AG490(50μmol/L)组;D组:AG490组;E组:IL-8+NAC(10mmol/L);F组:NAC,处理48h,RT-PCR检测MUC5B mRNA水平,ELISA法检测MUC5B蛋白水平,WB法检测p-JAK2、p-STAT6、JAK2、STAT6蛋白水平.结果:(1)IL-8可刺激肺上皮细胞中MUC5B产生,且MUC5B的表达随着IL-8浓度的增加而增加.(2)在一定浓度IL-8的作用下,MUC5B蛋白相对表达量随着时间的增加而增加.(3)加入MUC5B抑制剂NAC后,RT-PCR检测MUC5B mRNA水平,与E组相比,B组增高,C组降低(P<0.05),与A组相比,B组、C组表达均升高且B组升高更明显(P<0.05);加入JAK2抑制剂AG490后发现,相比于A组,B组p-STAT6、p-JAK2蛋白含量表达增加,MUC5B蛋白含量、mRNA表达增加,且有统计学意义(P<0.05).相比于B组,C组p-STAT6、p-JAK2蛋白含量表达降低,MUC5B蛋白含量、mRNA表达降低,且有统计学意义(P<0.05).而各组非磷酸化的STAT6、JAK2表达无明显变化.结论:(1)IL-8可刺激肺上皮细胞中黏蛋白MUC5B的表达,且与浓度、时间均有关.其中最适IL-8浓度为160ng/ml,最适处理时间为48h.(2)IL-8可能通过JAK2/STAT6途径调控MUC5B分泌.
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