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目的制备稳定高表达生物活性神经生长因子（nerve growth factor, NGF）工程视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞，拟将转基因基因治疗与视网膜移植技术结合，用于视网膜变性疾病的治疗。方法首先经亚克隆和克隆构建复制缺陷性逆转录病毒质粒重组体pLXSN-NGF, 然后经包装细胞pT67包装，获得含有NGF基因的复制缺陷性逆转录病毒重组体；NIH3T3细胞测定其滴度，然后转导培养RPE细胞；反转录聚合酶链反应和Western blot分析NGF基因在RPE细胞中的表达；PC12细胞测定表达产物的生物活性。结果复制缺陷性逆转录病毒滴度为1.2×107 cfu/ml,在转导RPE细胞及其条件培养液中，可检测出NGF mRNA和蛋白的存在，PC12细胞经转导RPE细胞条件培养液刺激长出轴突样突触。结论 RPE细胞能高效地被复制缺陷性逆转录病毒转导，高水平分泌表达了生物活性NGF, RPE细胞能成为一种理想的工程细胞。