【摘 要】
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目的 探讨H2O2预处理对1-甲基-4-苯基吡啶离子(l-methyl-4-phenylpyridinium,Mpp+)诱导PC12细胞毒性损伤的保护作用及其可能的机制.方法 分别用3-(4,5-二甲基噻唑.2)_-2,5一
【机 构】
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Department of Neurology, the Affiliated Union Hospital of Huazhong University of Science and Techolo
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目的 探讨H2O2预处理对1-甲基-4-苯基吡啶离子(l-methyl-4-phenylpyridinium,Mpp+)诱导PC12细胞毒性损伤的保护作用及其可能的机制.方法 分别用3-(4,5-二甲基噻唑.2)_-2,5一二苯基四氮唑嗅盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]和4,6-二氨基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色技术检测PC12细胞的活力及细胞凋亡核形态改变;West blot检测PC12细胞中14-3-3蛋白、磷酸化p38 MAPK的水平.酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测ERK1/2磷酸化水平.结果 Mpp+处理PC12细胞24 h使细胞活力显著下降(51.6%),DAPI染色显示(51.3±6.6)%的PC12细胞呈现核固缩等细胞凋亡形态改变;H2O2预处理能显著增加PC12细胞活力(83.4%),减少凋亡细胞数[(24.9±4.3)%],说明H2O2预处理能对抗MPP+毒性,对PC12细胞具有保护作用.West blot结果显示,H2O2预处理在减少PC12细胞凋亡的同时伴随有14-3-3蛋白及磷酸化p38MAPK表达上调;ELISA实验显示ERK1/2磷酸化水平显著增加.相关分析显示14-3-3蛋白表达的上调与ERK1/2磷酸化水平呈正相关(r=0.923,P<0.01),而且PD98059抑制ERK1/2磷酸化后,H2O2预处理诱导14-3-3蛋白表达上调的作用消失.结论 H2O2预处理能对抗MPP+对PC12细胞的毒性作用,这种保护作用与细胞内14-3-3蛋白表达上调有关;而14-3-3蛋白表达上调与ERK1/2和p38 MAPK信号通路的激活有关.
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