野生型及突变型人血管内皮生长因子A真核表达载体的构建与鉴定

• 作 者: 吴勇 刘学刚 郭嘉诚 李慧敏 宋伟 丁周志 王亚明 赵武 徐
• 机 构: 蚌埠医学院第一附属医院儿科,蚌埠医学院第一附属医院心胸外科,蚌埠医学院第一附属医院超声心动图室
• 出 处: 蚌埠医学院学报
• 发表日期: 2013年9期
• 关键词: 分子遗传学 血管内皮生长因子A 基因 重叠延伸PCR 定点突变 载体 molecular genetics vascular endothelial growt
• 基金项目: 安徽省自然科学基金项目（11040606M198）

目的：构建人野生型和c．454C〉T突变型血管内皮生长因子A（VEGFA）真核表达载体。方法：采用反转录聚合酶链反应扩增人VEGFA基因，用限制性核酸内切酶Bgl II和SalI双酶切后连接真核表达载体pEGFP—N1，构建野生型VEGFA真核表达载体（野生型pEGFP—VEGFA），通过双酶切和测序进行鉴定。采用定点诱变PCR技术构建C．454C〉T突变型人VEGFA真核表达载体（突变型pEGFP—VEGFA），同样通过双酶切和测序进行鉴定。结果：野生型和突变型pEGFP．VEGFA被双酶切为4697b