鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及生物学活性分析

• 作 者: 谭兵 王红宁 张毅 张安云 樊汶樵
• 机 构: 四川农业大学动物医学院,四川大学生命科学院四川大学',动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室',
• 出 处: 畜牧兽医学报
• 发表日期: 2009年5期
• 关键词: 鸡 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 原核表达 生物学活性
• 基金项目: 国家“十一五”863计划资助(2006AA10A205)

通过PCR方法扩增不含信号肽的鸡GM-CSF成熟蛋白基因，克隆至原核表达载体pET-32a（＋），构建原核表达质粒p32GM-CSF，通过IPTG诱导重组鸡GM-CSF蛋白表达，经镍离子亲和层析纯化后，用MTT法检测表达重组蛋白的生物学活性，并制备兔抗鸡GM-CSF多克隆抗体。结果表明成功地构建了p32GM-CSF原核表达质粒，SDS-PAGE结果显示表达的重组蛋白约34 ku，主要以包涵体形式表达，纯化后得到高纯度目的蛋白。West-ern Blot结果表明，该重组蛋白能与制备的抗鸡GM-CSF抗体特异