【摘 要】
：
目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)基因片段导入SMMC7721耐药细胞,干扰多药耐药相关蛋白1 (MRPl)基因后,观察其对细胞化疗敏感性的影响.方法 使用浓度递增法制作耐阿霉素(ADM)细胞株,将ADM浓度在2 mg/L时培养出的细胞,命名为SMMC7721/ADM细胞,转染25、50、75 nmol/L siRNA沉默此耐药株MRP1基因,于转染后24、48、72 h使用实时定量逆
【机 构】
：
518029深圳,武警广东省边防总队医院普通外科,中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科
论文部分内容阅读
目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)基因片段导入SMMC7721耐药细胞,干扰多药耐药相关蛋白1 (MRPl)基因后,观察其对细胞化疗敏感性的影响.方法 使用浓度递增法制作耐阿霉素(ADM)细胞株,将ADM浓度在2 mg/L时培养出的细胞,命名为SMMC7721/ADM细胞,转染25、50、75 nmol/L siRNA沉默此耐药株MRP1基因,于转染后24、48、72 h使用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞MRPl mRNA表达水平.于12、24、36、48、60 h用噻唑蓝(MTT)法检测细胞对化疗药物的敏感性,加入反应试剂进行流式细胞仪检测细胞凋亡水平,使用Western blot分别检测细胞中MRP1蛋白表达含量.细胞注入裸鼠右侧肩胛区,14 d后测量肿瘤的长径和宽径.结果 SMMC7721/ADM细胞对阿霉素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、奥沙利铂(OHP)的耐药系数分别为25.43、68.32、39.17、18.31.RT-qPCR检测沉默效率,可见MRP1的表达明显降低(P＜0.05).MRP1基因沉默后,Western blot技术可见MRP1蛋白明显降低.流式细胞仪可见细胞凋亡明显多于沉默前(P＜0.05).多药耐药性的检测可见细胞对上述药物耐药系数降低为5.73、15.86、2.49、1.84.动物实验监测肿瘤生长,可见肿瘤生长率明显降低.结论 SMMC7721耐药细胞株在使用siRNA沉默MRP1基因后,对化疗药的耐药性有明显下降.MRP1基因与SMMC7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默MRP1基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
其他文献
目的 对膝关节前交叉韧带(ACL)进行生物力学分析,探讨ACL的生物力学作用.方法 建立膝关节三维有限元模型,施加1150 N的轴向压力和100 N胫骨前向力,对膝关节进行以下2个方面生物力学分析:具有完整ACL的膝关节、切除ACL的膝关节.结果 ACL完整时,胫骨水平前向移位4.5 mm,ACL承受全部前向负荷的78％,轴向负荷的57％由膝关节外侧间室承载.切断ACL后,胫骨水平前向位移增至16
目的 探讨中电导性钙离子依赖性钾通道(KCNN4)通道在肝细胞再生蛋白-3(PRL-3)诱导结肠癌细胞Lovo上皮间质化(EMT)中的作用机制.方法 用KCNN4通道蛋白特异性阻滞剂TRAM-34和KCNN4-小干扰RNA(siRNA)分别处理已经稳定表达PRL-3的结肠癌Lovo-P细胞和对照组Lovo-C细胞,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Snail以及波动
目的 观察白细胞介素-17 (IL-17)在糖尿病大鼠肾组织中的表达,探讨其与肾小管-间质病变的关系.方法 90只大鼠随机分为对照组(Con组)、1型糖尿病组(T1DM组)及2型糖尿病组(T2DM组),以50 mg/kg链脲佐菌素(STZ)制备1型糖尿病模型,以高脂高糖饮食及25 mg/kgSTZ制备2型糖尿病模型.于2周、4周末采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血、尿中IL-17水平；4周末
肝癌患者的预后差,手术切除被认为是根治肝癌的最好手段,但术后容易发生复发转移,然而对于肝癌复发转移目前治疗手段有限[1].我们前期的研究表明:钙蛋白酶小亚基1(Capn4)的表达随肝癌细胞侵袭转移潜能密切相关[2].但其具体机制尚不清楚,本研究旨在探讨Capn4促进肝癌侵袭与转移的机制.一、材料与方法1.材料:HCCLM6由复旦大学附属中山医院肝癌研究所樊嘉教授惠赠[3],pGMLV-shRNA-
目的 探讨应用淫羊藿苷促进人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成软骨分化的可行性及效果。方法体外分离培养hMSCs，取第3代细胞实验。将hMSCs分别用无血清高糖培养基（H．DMEM）和含1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol／L淫羊藿苷的软骨诱导液（CM）诱导，显微镜下观察细胞形态变化，噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖。以5×10^9/L的细胞密度离心构建微团，诱导
近年来贵金属纳米材料的制备及应用研究日渐活跃,纳米金作为贵金属纳米材料的代表,因其优良的生物相容性、化学稳定性和独特的光学性能成为最受生物医学界瞩目的材料之一.最令我们感兴趣的是其光学性质,根据Mie和Gians的理论,金属材料的光学性质与材料尺寸和形状密切相关,金纳米棒、纳米花、纳米笼等由于尺寸和形貌的变化引起表面电子的等离子共振变化(SPR),使材料的等离基元共振吸收峰由可见光区红移至近红外光
目的 观察颈椎前路减压植骨融合术后相邻节段生物力学变化.方法 采用EB复合树脂黏合的方法模拟颈椎前路减压植骨术后融合的效果,检测颈椎融合前、后相邻节段运动范围及生物力学的变化.结果 在2.0 Nm力矩不变的情况下,融合节段相邻间隙的运动范围为4.3°～8.0°,与融合前比较差异无统计学意义(P＞0.05)；加大力矩使融合后的颈椎尽量达到术前正常运动范围时融合节段相邻间隙运动范围明显增加,与融合前比
本实验旨在探讨裸鼠背部皮肤褶皱模型的建立方法,在活体荧光显微技术支持下,观察动物模型体内微血管的生长分布.一、材料和方法1.材料:雌性裸鼠37只,体质量22 ～ 25 g;购自大连医科大学SPF动物实验中心.模型所需小室套件购自美国APJ公司。
目的 观察组蛋白乙酰转移酶抑制剂C646分子联合腰果酸(AA)对雄激素非依赖性前列癌细胞的影响,并探讨其机制.方法 将实验分为4组即对照组、C646组、AA组及联合用药组,通过细胞增殖与毒性检测试剂盒MTS、Transwell实验、流式细胞仪、倒置显微镜等检测药物对细胞的影响.结果 C646半数抑制浓度约为20 μmol/L,AA的安全浓度约为25 μmol/L,C646组、AA组及联合用药组药物
目的 探讨缬沙坦对重症急性胰腺炎(SAP)时胰腺微循环的作用及其机制.方法 假手术组(SO组)逆行胆胰管注射等量生理盐水；SAP组胆胰管逆行注射牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型；缬沙坦组(Ⅴ组)于造模后10 min股静脉注射缬沙坦.检测3、6、12h各组大鼠血清淀粉酶(AMY)和丙二醛(MDA)的水平及血液P选择素的表达,取胰头部胰腺组织行病理学检查,测定胰腺组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和髓过氧化物