【摘 要】
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目的构建一组具有AAV载体复制和包装功能的重组HSV-1,从中选出功能较强者用于重组AAV的生产.方法采用一套含有HSV-1基因组的粘粒系统构建重组HSV-1.首先将2型腺病毒伴随病毒(
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目的构建一组具有AAV载体复制和包装功能的重组HSV-1,从中选出功能较强者用于重组AAV的生产.方法采用一套含有HSV-1基因组的粘粒系统构建重组HSV-1.首先将2型腺病毒伴随病毒(AAV-2)rep基因的起始密码子ATG人工定点突变成ACG;然后将自身启动子控制下的AAV-2 rep(起始密码子突变或未突变)和cap基因分别插入粘粒上HSV-1的UL2基因或UL44基因,构建成重组粘粒cos6-rmc/ΔUL2、cos56-rc/ΔUL44 cos56-rmc/ΔUL44;将重组粘粒上的HSV-1片段分别与HSV-1的其余片段进行同源重组,得到3株重组HSV-1.连同过去报道的一株重组HSV-1一起,分别命名为HSV1-rc/ΔUL2、HSV1-rmc/ΔUL2、HSV1-rc/ΔUL44、HSV1-rmc/ΔUL44.结果 4 株重组HSV-1经PCR鉴定均含有rep基因,分别感染携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的AAV载体细胞株后均能产生重组AAV.重组AAV可在BHK-21细胞中表达GFP.HSV1-rc/ΔUL2和HSV1-rmc/ΔUL2对AAV载体的包装能力明显强于HSV1-rc/ΔUL44和HSV1-rmc/ΔUL44.结论构建的4 株重组HSV-1均具有复制和包装重组AAV的能力.其中HSV1-rc/ΔUL2和HSV1-rmc/ΔUL2功能较强,有望用于重组AAV的大规模生产.
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