【摘 要】
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目的研究miRNA(microRNA)沉默p65基因后对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞周期分布的影响。方法用pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体构建p65 miRNA表达质粒,转染MDA-MB-231细胞,用RT
【机 构】
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河北医科大学第四医院科研中心河北省肿瘤研究所免疫室,河北省肿瘤基因诊断、预防和治疗重点实验室
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目的研究miRNA(microRNA)沉默p65基因后对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞周期分布的影响。方法用pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体构建p65 miRNA表达质粒,转染MDA-MB-231细胞,用RT-PCR检测转染前后各组细胞中p65 mRNA表达变化;凝胶电泳迁移率改变分析(elec-trophoretic mobility shift assay,EMSA)实验研究转染前后细胞中NF-κB结合活性的变化;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)观察转染前后细胞周期分布的变化;Western blot法检测转染前后细胞周期相关因子cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果 p65 miRNA质粒明显下调MDA-MB-231细胞中p65 mRNA的表达水平,并显著抑制细胞中NF-κB的结合活性(P<0.05)。FCM结果显示,转染组细胞G0/G1期细胞比例显著增加,S、G2/M期细胞比例明显下降(P<0.05);Western blot分析结果显示,沉默p65基因后细胞中cyclinD1蛋白表达下调,p21蛋白表达增加。结论 p65 miRNA可以显著降低p65 mRNA的表达,诱导乳腺癌细胞发生G0/G1期阻滞,可能是通过降低cyclinD1蛋白,上调p21蛋白表达而实现的。
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