【摘 要】
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目的探索慢病毒介导的成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术下调原代T细胞PD-1基因的可行性。方法将多个PD-1靶向序列作为sgRNA序列体外合成后，分别插入带有cas9基因的慢病毒载体pLentiCRISPR中，包装慢病毒并感染原代T细胞，通过流式细胞术分析CRISPR技术敲除对PD-1表达的影响。结果构建了6个靶向基因PD-1不同位点的pLentiCRISPR载体A1～A6，并且包装
【机 构】
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200240 上海交通大学生命科学技术学院盛毓绶细胞与免疫学研究中心,200240 上海交通大学医学院附属仁济医院,200240 上海交通大学生命科学技术学院盛毓绶细胞与免疫学研究中心,200240
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目的探索慢病毒介导的成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)技术下调原代T细胞PD-1基因的可行性。
方法将多个PD-1靶向序列作为sgRNA序列体外合成后，分别插入带有cas9基因的慢病毒载体pLentiCRISPR中，包装慢病毒并感染原代T细胞，通过流式细胞术分析CRISPR技术敲除对PD-1表达的影响。
结果构建了6个靶向基因PD-1不同位点的pLentiCRISPR载体A1～A6，并且包装病毒。发现原代T细胞的激活状态与PD-1的表达相伴随，以及PD-1高表达细胞群中存在CD25共表达现象。含有靶向基因PD-1的CRISPR病毒分别感染T细胞后，A2和A6对PD-1高表达的细胞群敲除效率最好，分别为19%和29%。
结论CRISPR技术可在原代T细胞中有效敲除PD-1。
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