猪IL-18在毕赤酵母中的表达及活性分析

• 作 者: 宋世斌 景志忠 陈国华 王笑笑 宗瑞谦
• 机 构: 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃省动物寄生虫病重点实验室、家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃农业大学动物医学院
• 出 处: 生物工程学报
• 发表日期: 2007年5期
• 关键词: pIL-18 毕赤酵母 基因表达 纯化 生物活性 interleukin-18 Pichia pastoris gene expression purifica
• 基金项目: 国家高技术研究与发展项目（No.2006AA10A203）和兰州市科技攻关项目（Nos.05-1-47和06-2-23）资助.

采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中扩增出IL-18基因并构建真核融合表达载体pPIC9K-IL-18,电激法转化入毕赤酵母GS115,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,并将表达蛋白用凝胶层析柱纯化后,用MTT法检测其生物学活性。实验结果表明重组的GS115酵母菌株可表达分泌pIL-18,其表达在72h时达高峰,分泌量可达160mg/L,纯化的重组pIL-18蛋白具有显著的促进淋巴细胞增殖的活性,说明本试验已在毕赤酵母中在国内