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目的
评价七氟烷对大鼠离体海马神经元程序性坏死的影响及其与兰尼碱受体的关系。
方法原代培养SD大鼠胎鼠的海马神经元，培养7 d时，以5×105个/ml细胞密度接种于培养孔(100 μl/孔)或培养瓶(3 ml/瓶)中，采用随机数字表法分为3组(n＝24)：对照组(C组)、七氟烷组(S组)和兰尼碱受体拮抗剂组(R组)。C组常规培养，R组加入兰尼碱受体拮抗剂丹曲林，终浓度为3 μmol/L，30 min后将S组和R组细胞放置于含2%七氟烷的培养箱中，37 ℃培养5 h。收集细胞，倒置显微镜下观察神经元形态，采用流式细胞术检测细胞胞浆游离钙离子浓度([Ca2+]i)，采用Western blot法检测兰尼碱受体和磷酸化人混合系列蛋白激酶样结构域(p-MLKL)的表达，采用免疫荧光法检测受体相互作用蛋白激酶3的表达，计算程序性坏死率。
结果与C组比较，S组和R组神经元[Ca2+]i升高，兰尼碱受体和p-MLKL表达上调，程序性坏死率升高(P<0.05)；与S组比较，R组神经元[Ca2+]i降低，兰尼碱受体和p-MLKL表达下调，程序性坏死率降低(P<0.05)。C组神经元形态未见明显异常，S组神经元胞体皱缩，突起断裂及突起间网络稀疏；R组神经元胞体圆润，形态接近正常。
结论七氟烷可导致大鼠离体海马神经元程序性坏死，其机制与其上调兰尼碱受体表达，导致钙超载有关。