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【摘要】采用HPLC梯度洗脱法测定刺五加注射液中紫丁香苷与刺五加苷E含量，表明：样品经Cosmosil C18柱，使用紫外检测器（波长220nm），以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，样品中紫丁香苷、刺五加苷E与相邻杂质峰分离度大于1.5，平均回收率90.5-99.8%之间，变异系数RSD<4%。
【关键词】HPLC 梯度洗脱；紫丁香苷；刺五加苷E
1引言
刺五加为五加科植物刺五加的干燥茎。其味辛，具有益气健脾，补肾安神的作用。质量标准中把紫丁香苷、刺五加苷E含量作为评价质量的重要指标。
黑龙江金九药业生产刺五加注射液近30年历史，长期以来一直对刺五加注射液有效成份进行深入的研究。本实验采用高效液相色谱法中梯度洗脱方式对成份紫丁香苷与刺五加苷E进行含量测定。
2 实验部分
2.1材料及方法
2.1.1 仪器和试剂美国安捷伦1100系列液相色谱仪，安捷伦1100系列液相色谱仪专用工作站软件（安捷伦公司）；BP211D塞多利斯电子天平。甲醇、乙腈（美国迪马公司）；对照品（中国食品药品生物制品检定所）
2.1.2实验方法
2.1.2.1对照品溶液的配制取紫丁香苷对照品、刺五加苷E对照品适量，精密称定，分别加50%甲醇制成每1ml各含紫丁香苷40μg、刺五加苷E40?g的溶液，即得。
3结果与讨论
3.1紫丁香苷、刺五加苷E含量的测定
3.1.1 色谱条件的选择色谱柱为以十八烷基键合硅胶为填充剂柱（2.1mm×150mm,5μm）；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为220nm。理论板数按紫丁香苷峰计算不低于10000；刺五加苷E峰与相邻杂质峰的分离度应不小于
1.5。
3.1.2 线性关系的考察
3.1.2.1考察项目以刺五加提取液紫丁香苷、刺五加苷E含量测定验证该检验方法的线性。
3.1.2.2合格标准相关系数r：不得低于0.990（高效液相法）
3.1.2.3验证方法对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷、刺五加苷E对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液2μl、3μl、4μl、5μl、6μl，注入液相色谱仪，测定，即得。以测得的峰面积作为纵坐标，进样量（ug）为横坐标，进行线性回归。计算回归方程及相关系数。验证结果记录于表1。
（1）实验结果表1紫丁香苷、刺五加苷E含量测定线性关系验证结果
所得回归方程Y=-6.5+6000X；0.04～0.12mg/ml相关系数r=0.9996
（2）实验结论：紫丁香苷、刺五加苷E含量测定线性关系良好。
3.1.3 精密度实验精密吸取同一浓度的对照品溶液，重复进样5次，每次2μL，3μL，4μL，5μL，6μL测定紫丁香苷、刺五加苷E峰面积积分值的RSD为0.99%（n=5）
表2 紫丁香苷含量测定准确度验证结果
实验结论：紫丁香苷、刺五加苷E峰面积积分值的RSD为0.99%，回收率90.5-99.8%之间。
3.1.4 专属性实验以刺五加提取液作为供试品，以不加样品用含量测定用溶剂水作为阴性对照验证含量测定的专属性。
表3紫丁香苷、刺五加苷E含量测定结果
相对标准偏差（%）：0.99%
专属性实验结论：含量测定：供试品在与对照品相同保留时间处，有可检测出的峰，理论板数和分离度符合系统适用性要求。阴性对照在与对照品相同保留时间处，没有可检测出的峰。
3.1.5 样品中紫丁香苷、刺五加苷E含量测定供试品溶液的制备精密量取本品3ml（250ml规格），置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL（HPLC），注入液相色谱仪，测定，即得。按实验方法测定5次。
分离度大于1.8
4 结论
样品经以上条件进行梯度洗脱，样品中紫丁香苷、刺五加苷E与相邻杂质峰分离度大于1.5，平均回收率90.5-99.8%之间，变异系数RSD<4%。此方法适合进行两有效成份的检测。
参考文献
[1]中华人民共和国药典2010年版二部
[2]杨书良、杨渡等。大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究[J]中草药 2008.39（9） 1327
[3]刘树民杨补科卢芳等。刺五加苷B、苷E在体外大鼠肠道菌群中的代谢 中国药师2011.08-1092
【关键词】HPLC 梯度洗脱；紫丁香苷；刺五加苷E
1引言
刺五加为五加科植物刺五加的干燥茎。其味辛，具有益气健脾，补肾安神的作用。质量标准中把紫丁香苷、刺五加苷E含量作为评价质量的重要指标。
黑龙江金九药业生产刺五加注射液近30年历史，长期以来一直对刺五加注射液有效成份进行深入的研究。本实验采用高效液相色谱法中梯度洗脱方式对成份紫丁香苷与刺五加苷E进行含量测定。
2 实验部分
2.1材料及方法
2.1.1 仪器和试剂美国安捷伦1100系列液相色谱仪，安捷伦1100系列液相色谱仪专用工作站软件（安捷伦公司）；BP211D塞多利斯电子天平。甲醇、乙腈（美国迪马公司）；对照品（中国食品药品生物制品检定所）
2.1.2实验方法
2.1.2.1对照品溶液的配制取紫丁香苷对照品、刺五加苷E对照品适量，精密称定，分别加50%甲醇制成每1ml各含紫丁香苷40μg、刺五加苷E40?g的溶液，即得。
3结果与讨论
3.1紫丁香苷、刺五加苷E含量的测定
3.1.1 色谱条件的选择色谱柱为以十八烷基键合硅胶为填充剂柱（2.1mm×150mm,5μm）；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为220nm。理论板数按紫丁香苷峰计算不低于10000；刺五加苷E峰与相邻杂质峰的分离度应不小于
1.5。
3.1.2 线性关系的考察
3.1.2.1考察项目以刺五加提取液紫丁香苷、刺五加苷E含量测定验证该检验方法的线性。
3.1.2.2合格标准相关系数r：不得低于0.990（高效液相法）
3.1.2.3验证方法对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷、刺五加苷E对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液2μl、3μl、4μl、5μl、6μl，注入液相色谱仪，测定，即得。以测得的峰面积作为纵坐标，进样量（ug）为横坐标，进行线性回归。计算回归方程及相关系数。验证结果记录于表1。
（1）实验结果表1紫丁香苷、刺五加苷E含量测定线性关系验证结果
所得回归方程Y=-6.5+6000X；0.04～0.12mg/ml相关系数r=0.9996
（2）实验结论：紫丁香苷、刺五加苷E含量测定线性关系良好。
3.1.3 精密度实验精密吸取同一浓度的对照品溶液，重复进样5次，每次2μL，3μL，4μL，5μL，6μL测定紫丁香苷、刺五加苷E峰面积积分值的RSD为0.99%（n=5）
表2 紫丁香苷含量测定准确度验证结果
实验结论：紫丁香苷、刺五加苷E峰面积积分值的RSD为0.99%，回收率90.5-99.8%之间。
3.1.4 专属性实验以刺五加提取液作为供试品，以不加样品用含量测定用溶剂水作为阴性对照验证含量测定的专属性。
表3紫丁香苷、刺五加苷E含量测定结果
相对标准偏差（%）：0.99%
专属性实验结论：含量测定：供试品在与对照品相同保留时间处，有可检测出的峰，理论板数和分离度符合系统适用性要求。阴性对照在与对照品相同保留时间处，没有可检测出的峰。
3.1.5 样品中紫丁香苷、刺五加苷E含量测定供试品溶液的制备精密量取本品3ml（250ml规格），置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL（HPLC），注入液相色谱仪，测定，即得。按实验方法测定5次。
分离度大于1.8
4 结论
样品经以上条件进行梯度洗脱，样品中紫丁香苷、刺五加苷E与相邻杂质峰分离度大于1.5，平均回收率90.5-99.8%之间，变异系数RSD<4%。此方法适合进行两有效成份的检测。
参考文献
[1]中华人民共和国药典2010年版二部
[2]杨书良、杨渡等。大孔吸附树脂富集刺五加中紫丁香苷和刺五加总苷的研究[J]中草药 2008.39（9） 1327
[3]刘树民杨补科卢芳等。刺五加苷B、苷E在体外大鼠肠道菌群中的代谢 中国药师2011.08-1092