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【目的】构建用于制备级分离及高效鉴定黑麦籽粒Waxy蛋白亚基的技术体系，为该亚基理化特性的分析、功能的发掘及Waxy种质的快速筛选等提供理论参考。【方法】设计特异引物从灌浆期间的奥地利黑麦籽粒cDNA中克隆获得Waxy，并进行体外表达；利用DuoFlow对籽粒蛋白提取物进行纯化，对峰值收集物、原核表达产物及其Ni柱纯化的重组Waxy蛋白进行SDS-PAGE分离，挖取蛋白条带进行MALDI-TOF质谱鉴定，结合经由基因序列所推导的氨基酸序列，确定回收产物的Waxy蛋白属性；在优化电泳条件的基础上构建针对Wa