论文部分内容阅读
【目的】建立一种能在临床上快速、准确检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的TaqMan实时荧光定量PCR方法。[方法】根据GenBank中已公布的PCV-2陕西分离株的全基因序列,在PCV2的ORF2核苷酸序列的保守区域,设计合成1条TaqMan探针和1对特异性引物;利用设计的引物扩增ORF2部分基因并鉴定后,回收PCR扩增产物,连接pMD19-T载体,转化DH5a大肠杆菌,涂布Amp’琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定后提取质粒,作为荧光定量PCR的标准品;以标准品为模板建立检测PCV2的TaqMan