【摘 要】
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目的建立免疫磁珠法分离,并培养人脑胶质瘤干细胞的方法。方法将术中取得的脑胶质瘤标本,通过剪切、消化和吹打成单细胞悬液,筛网过滤,免疫磁珠分选试剂盒分选出CD133+细胞,
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科
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目的建立免疫磁珠法分离,并培养人脑胶质瘤干细胞的方法。方法将术中取得的脑胶质瘤标本,通过剪切、消化和吹打成单细胞悬液,筛网过滤,免疫磁珠分选试剂盒分选出CD133+细胞,用神经干细胞无血清培养法培养出具有单细胞克隆能力的细胞球,取第3代进行诱导分化,分化前后用免疫细胞荧光化学方法鉴定肿瘤干细胞及分化后细胞。结果免疫磁珠分选出的CD133+细胞,可悬浮生长并形成神经干细胞样细胞球,有较强的增殖能力,干细胞标志物巢蛋白(nestin)阳性,分化后细胞表达神经元小管相关蛋白-β3(-βtubulin 3)和星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)特异性抗原,而巢蛋白、CD133阴性,并具有肿瘤的核型。结论免疫磁珠分选法可避免原代培养中众多细胞混杂生长的发生,能够从大量肿瘤细胞中分离出只占极少比例的肿瘤干细胞,细胞结合磁珠后在体外可以长期培养和传代,进一步证实了肿瘤干细胞的存在,并为胶质瘤干细胞的研究奠定基础。
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