普通小麦幼苗叶肉细胞原生质体分离方法的优化

• 作 者: 席海秀 艾可筠 佟少明
• 机 构: 辽宁师范大学生命科学学院辽宁省植物生物工程重点实验室
• 出 处: 生物技术通报
• 发表日期: 2016年08期
• 关键词: 普通小麦 原生质体 分离 瞬时表达 common wheat protoplast isolation transient expression

以7日龄小麦幼苗的叶肉细胞为材料,采用正交试验分析了纤维素酶浓度、离析酶浓度、酶解时间、甘露醇浓度对原生质体分离时的产量和活力的影响;采用瞬时表达技术通过PEG-Ca~(2+)介导法转化小麦的原生质体,分析了PEG浓度对转化效率的影响。结果表明,小麦叶片原生质体分离的最佳条件为纤维素酶1.5%,离析酶0.75%,甘露醇0.4 mol/L,酶解时间3 h,得到的原生质体的产量可达到7.2×10~6个/g·FW,活力超过95%;瞬时表达实验结果表明,在25%PEG浓度下,小麦原生质体的转化效率最高。