【摘 要】
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目的构建S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌,为酶促转化法生产S-腺苷甲硫氨酸奠定基础.方法应用PCR技术从S-腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S-腺苷甲硫氨酸合成酶
【机 构】
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金陵药业股份有限公司,中国药科大学生物化学教研室
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目的构建S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌,为酶促转化法生产S-腺苷甲硫氨酸奠定基础.方法应用PCR技术从S-腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2,将其克隆至表达载体pT7-7,转化大肠杆菌,1%琼脂糖电泳比较大小,筛选重组子.结果 SDS-PAGE显示重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为42KDa,平均表达量约占菌体总可溶性蛋白的42%,酶活达到14.1 U/g湿菌体,比宿主菌酶活提高15.7倍.结论酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达,重组菌已具有初步的工业化应用价值.
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