【摘 要】
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以牛分枝杆菌vallee Ⅲ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,吉林农业大学
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以牛分枝杆菌vallee Ⅲ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85b-e6.将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmo1/L)进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Westem blot分析融合蛋白的免疫活性.结果表明:表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni2+亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应.
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