探讨自噬对脓毒症小鼠中性粒细胞程序性死亡配体-1（PD-L1）表达的影响及其作用机制。
方法①体内实验：将6～8周龄雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿孔术（CLP）组和雷帕霉素（RAP）+CLP组，每组10只。采用CLP模拟脓毒症模型；Sham组不结扎盲肠及穿孔，其他操作同CLP组。RAP+CLP组小鼠于制模前7 d腹腔注射自噬激动剂RAP 4 mg·kg-1·d-1；Sham组和CLP组不予任何处理。各组于术后4 d留取肺脏、肝脏、脾脏和胰腺组织进行免疫组化染色，光镜下观察各器官中性粒细胞的浸润情况；通过免疫荧光染色检测术后1 d、4 d小鼠肺脏中性粒细胞免疫抑制分子PD-L1和自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3 （LC3）的表达。②体外实验：提取和重悬小鼠骨髓中性粒细胞至1×1010/L，分为空白对照组（不给予任何处理）、RAP对照组（RAP 100 μmol/L）、自噬抑制剂Bafilomycin A1（Baf）对照组（Baf 10 μmol/L）、脂多糖（LPS）刺激组（LPS 1 mg/L）、RAP+LPS组、Baf+LPS组，后两组分别于LPS刺激前30 min给予100 μmol/L RAP或10 μmol/L Baf预处理。于LPS刺激0、4、12 h用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测中性粒细胞PD-L1 mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测PD-L1、LC3和自噬相关蛋白p62的蛋白表达。
结果①体内实验：免疫组化显示CLP术后4 d小鼠肺脏、肝脏、脾脏和胰腺组织中均有大量中性粒细胞浸润；免疫荧光显示，随CLP术后时间延长，小鼠肺脏中性粒细胞LC3阳性表达呈降低趋势，而PD-L1的表达大幅度升高；给予RAP预处理可以促进CLP小鼠LC3的表达，同时抑制PD-L1的表达。②体外实验：在mRNA水平上，随LPS刺激时间延长，小鼠中性粒细胞PD-L1 mRNA表达均呈持续升高趋势，12 h达峰值，且明显高于空白对照组（2-ΔΔCT：72.2±10.0比13.0±0.8，P<0.01）；给予自噬抑制剂RAP预处理后，PD-L1的mRNA表达较LPS刺激组明显降低（2-ΔΔCT：12 h为47.4±7.3比72.2±10.0，P<0.01）；而给予自噬激动剂Baf预处理后，PD-L1的mRNA表达则较LPS刺激组明显升高（2-ΔΔCT：12 h为109.1±7.4比72.2±10.0，P<0.01）。在蛋白水平上，LPS刺激中性粒细胞后4 h，PD-L1、LC3及p62阳性表达较空白对照组显著增加，且PD-L1和p62随时间延长呈持续增加趋势；当使用RAP预处理后，PD-L1和p62阳性表达明显减少，而LC3表达进一步增加，说明自噬水平增加，自噬流通畅；与此相反，当使用Baf预处理后，PD-L1、LC3及p62表达均显著增加，说明自噬体与溶酶体的结合受阻，自噬流不畅。
结论脓毒症时中性粒细胞在各个器官的浸润增加，肺脏中性粒细胞PD-L1表达明显增加，而自噬水平有所下降；LPS刺激下的中性粒细胞PD-L1表达可以被自噬激动剂所抑制，被自噬抑制剂所促进；PD-L1对脓毒症具有负向调控作用，可以通过靶向促进自噬来抑制脓毒症时PD-L1的表达，从而改善脓毒症。