【摘 要】
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从GenBank中检索人源心肌肌钙蛋白C亚基(cTnC)和心肌肌钙蛋白I亚基(cTnI)编码序列,合成cTnC和cTnI第30至110氨基酸基因-cTnI(P),并在两者之间合成一段由15个氨基酸(G4S)3组成
【机 构】
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广州正孚检测技术有限公司,广州万孚生物技术股份有限公司,
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从GenBank中检索人源心肌肌钙蛋白C亚基(cTnC)和心肌肌钙蛋白I亚基(cTnI)编码序列,合成cTnC和cTnI第30至110氨基酸基因-cTnI(P),并在两者之间合成一段由15个氨基酸(G4S)3组成的接头(linker)序列。构建原核表达载体pColdⅠ-cTnC-linker-TnI(P),转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,结果在大肠杆菌中成功实现了cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白的稳定可溶性高表达。经Ni 2+柱纯化后得到纯度大于95%的cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白,制备冻干品并采用万孚飛测?心肌肌钙蛋白I(cTnI)定量检测试剂盒检测其稳定性。cTnC-linker-TnI(P)冻干品在37℃可稳定保存10d以上,25℃、4℃稳定保存4个月以上。本研究获得的cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料。
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