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[摘 要]目的 建立注射用盐酸表柔比星含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为waters柱（150mm*4.6mm，5um），以甲醇：水：乙腈（35：45：20）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长为254nm。结果 乳糖及羟苯甲酯不干扰本品含量测定，耐用性试验结果符合要求，系统适用性试验结果表明表柔比星与多柔比星分离度符合规定，溶液溶度在0.2mg/ml～1.0mg/ml的范围内线性好，准确度试验的平均回收率为99.8%，RSD为1.6%，重复性及中间精密度符合规定，溶液稳定性实验结果表明溶液在4小时内稳定。 结论 所建立的含量测定方法操作简便、准确，重现性好，可用于本品含量测定。
[关键词]表柔比星 方法学 含量测定
中图分类号：O856 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）07-0050-01
盐酸表柔比星为阿霉素的主体异构体，是阿霉素氨基糖部分中 C4羟基的反式构型，它既可直接嵌入 DNA，与 DNA的双螺旋结构形成复合物，阻断依赖于 DNA的 RNA形成，又有形成超氧基自由基的动能本品为半合成的第二代蒽环类抗癌抗生素。主要药理作用为直接嵌入DNA，与其双螺旋结构形成复合物，从而阻断RNA合成，它还可形成超氧基自由基团，因此本药既可作用于细胞核，又可影响瘤细胞的细胞膜和其运转系统，属细胞周期非特异性药物。。我们采用高效液相色谱法测定唑来膦酸制剂含量，建立本品含量测定方法[1-4]。
1.仪器与试药
Agilent 1200 Series高效液相色谱仪（DAD检测器），色谱柱Waters C18？ 5μm？ 4.6×150mm
表柔比星对照品（含量：99.8%），盐酸多柔比兴对照品，来源均为中检院，注射用盐酸表柔比星由哈药集团生物工程公司提供，其它试剂均为色谱纯，乳糖及羟苯甲酯为处方中辅料，均为药用级辅料。
2.方法与结果
色谱条件与系统适用性试验？？用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水：乙腈（35：45：20）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长为254nm。理论塔板数以表柔比星计不低于8000。
测定法？？取本品，精密称定，用流动相溶解并制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另精密称取对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
2.1 系统适用性
取盐酸表柔比星及盐酸多柔比星对照品，加流动相溶解制成0.5mg/ml的溶液，按照测定法进样，考察分离度，结果盐酸表柔比星与多柔比星分离度为4.5，符合规定，峰纯度监测结果表明峰纯度符合规定，说明表柔比星与其它杂质峰亦可有效分离。
2.2 专属性试验
取表柔比星、空白辅料（乳糖、羟苯甲酯），分别加流动相溶解，按照拟定方法进样测定，结果盐酸表柔比星与其它物质可有效分离，盐酸表柔比星峰纯度符合规定，表明辅料不干扰含量测定。在该色谱条件下，主峰对称因子0.99，塔板数12000。
2.3 耐用性试验
更换色谱柱（三根不同型号的色谱柱）、流动相的比例（流动相变化±5%）、色谱柱的柱温（25℃、30℃、35℃）及流速（1.8ml/min、2.0ml/min、2.2ml/min），考察各项指标变化对含量测定影响，结果表明各项指标变化对含量测定结果无明显影响，耐用性试验符合规定。在各种色谱条件下对称因子在0.9至1.1之间，塔板数均大于12000。
2.4 线性范围
精密称取盐酸表柔比星对照品适量，加流动相溶解并稀释至100ml，摇匀，作为表柔比星对照品的储备溶液。分别精密量取对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，置25ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀。制成系列溶度溶液，分别精密量取上述对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记
录色谱图峰面积，以盐酸表柔比星溶液的浓度为横坐标，表柔比星的峰面积为纵坐标，计算线性回归方程，？结果当进样量为20μl时盐酸表柔比星在0.2g/ml～1.0mg/ml浓度范围内线性关系良好，线性试验符合规定。
2.5 准确度试验
精密称取盐酸表柔比星对照品适量，加流动相并稀释制成0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。精密称取盐酸表柔比星原料适量各9份，分别置于25ml的容量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2ml，加流动相稀释至10ml，作为供试品溶液80%、100%、120%组。精密量取对照品溶液及各供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算唑来膦酸的含量，计算回收率。结果表明平均回收率为99.8%，RSD为0.2%，准确度试验符合要求。
2.6 重复性及中间精密度试验
分别精密称取供试品6份，分别加流动相使溶解并稀释制成供试品溶液，所配制6分供试品溶液溶度相同。按照含量测定方法进行试验，测定供试品含量，结果表明本品平均含量为99.1%，RSD为1.4%，重复性试验较好。
取供试品，照含量测定方法进行试验，变动因素为人员、时间，考察含量测定结果变化情况。结果6次测定平均含量为99.2%，RSD为0.9%，中间精密度符合规定。
2.7 溶液稳定性试验
精密称取供试品适量，按照含量测定方法制备盐酸表柔比星供试品溶液，室温条件下放置放置8小时，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时及8小时进样。考察主峰峰面积变化，结果4小时内峰面积的RSD为0.5%，表明供试品溶液在室温条件下放置4小时内较稳定（6小时及8小时峰面积明显变化）。
上述方法学验证结果表明本品含量测定方法可行。
2.8 样品含量测定
取注射用盐酸表柔比星每批样品各10瓶，精密称定，用流动相溶解制成0.5mg/ml的溶液，按照所确定含量测定方法测定供试品含量，结果三批供试品含量分别为99.5%、101.4%、99.8%。理论塔板数大于12000，峰纯度监测结果表明峰纯度符合规定，系统适用性结果表明分离度符合规定。
3.讨论
本品含量测定关键为系统适用性考察，盐酸表柔比星与多柔比星不易分离，筛选流动相比例，使二者有效分离，同时进行峰纯度监测，对本品进行方法验证，结果表明所建立含量测定方法可行，操作简便，结果准确，重现性好，专属性强，可用于盐酸表柔比星制剂含量测定。
参考文献
[1] 邢来全，孙晓圆，张丽. HPLC测定注射用盐酸表柔比星的含量.食品与药品，2013年第15卷第3期：198-200.
[2] 李晓光；翟所迪；李珍；？杜亚薇；？张婷；？王彩利.3种注射用盐酸表柔比星溶液的稳定性考察. 中国药学杂志，2013年4月第48卷第8期：615-620.
[3] 张玫，殷璐.反相HPLC法测定注射用盐酸多柔比星含量及其有关物质. 药学进展，2000年第24卷第6期：355-358.
[4] 刘超；张萍.盐酸表柔比星药理作用及含量测定研究进展.北方要学，2014年第11卷第5期：72-73.
作者简介：
董海飞，哈药集团生物工程有限公司，质量检测中心化验员。
[关键词]表柔比星 方法学 含量测定
中图分类号：O856 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）07-0050-01
盐酸表柔比星为阿霉素的主体异构体，是阿霉素氨基糖部分中 C4羟基的反式构型，它既可直接嵌入 DNA，与 DNA的双螺旋结构形成复合物，阻断依赖于 DNA的 RNA形成，又有形成超氧基自由基的动能本品为半合成的第二代蒽环类抗癌抗生素。主要药理作用为直接嵌入DNA，与其双螺旋结构形成复合物，从而阻断RNA合成，它还可形成超氧基自由基团，因此本药既可作用于细胞核，又可影响瘤细胞的细胞膜和其运转系统，属细胞周期非特异性药物。。我们采用高效液相色谱法测定唑来膦酸制剂含量，建立本品含量测定方法[1-4]。
1.仪器与试药
Agilent 1200 Series高效液相色谱仪（DAD检测器），色谱柱Waters C18？ 5μm？ 4.6×150mm
表柔比星对照品（含量：99.8%），盐酸多柔比兴对照品，来源均为中检院，注射用盐酸表柔比星由哈药集团生物工程公司提供，其它试剂均为色谱纯，乳糖及羟苯甲酯为处方中辅料，均为药用级辅料。
2.方法与结果
色谱条件与系统适用性试验？？用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水：乙腈（35：45：20）为流动相，流速为2.0ml/min，检测波长为254nm。理论塔板数以表柔比星计不低于8000。
测定法？？取本品，精密称定，用流动相溶解并制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另精密称取对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
2.1 系统适用性
取盐酸表柔比星及盐酸多柔比星对照品，加流动相溶解制成0.5mg/ml的溶液，按照测定法进样，考察分离度，结果盐酸表柔比星与多柔比星分离度为4.5，符合规定，峰纯度监测结果表明峰纯度符合规定，说明表柔比星与其它杂质峰亦可有效分离。
2.2 专属性试验
取表柔比星、空白辅料（乳糖、羟苯甲酯），分别加流动相溶解，按照拟定方法进样测定，结果盐酸表柔比星与其它物质可有效分离，盐酸表柔比星峰纯度符合规定，表明辅料不干扰含量测定。在该色谱条件下，主峰对称因子0.99，塔板数12000。
2.3 耐用性试验
更换色谱柱（三根不同型号的色谱柱）、流动相的比例（流动相变化±5%）、色谱柱的柱温（25℃、30℃、35℃）及流速（1.8ml/min、2.0ml/min、2.2ml/min），考察各项指标变化对含量测定影响，结果表明各项指标变化对含量测定结果无明显影响，耐用性试验符合规定。在各种色谱条件下对称因子在0.9至1.1之间，塔板数均大于12000。
2.4 线性范围
精密称取盐酸表柔比星对照品适量，加流动相溶解并稀释至100ml，摇匀，作为表柔比星对照品的储备溶液。分别精密量取对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，置25ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀。制成系列溶度溶液，分别精密量取上述对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记
录色谱图峰面积，以盐酸表柔比星溶液的浓度为横坐标，表柔比星的峰面积为纵坐标，计算线性回归方程，？结果当进样量为20μl时盐酸表柔比星在0.2g/ml～1.0mg/ml浓度范围内线性关系良好，线性试验符合规定。
2.5 准确度试验
精密称取盐酸表柔比星对照品适量，加流动相并稀释制成0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。精密称取盐酸表柔比星原料适量各9份，分别置于25ml的容量瓶中，加流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2ml，加流动相稀释至10ml，作为供试品溶液80%、100%、120%组。精密量取对照品溶液及各供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算唑来膦酸的含量，计算回收率。结果表明平均回收率为99.8%，RSD为0.2%，准确度试验符合要求。
2.6 重复性及中间精密度试验
分别精密称取供试品6份，分别加流动相使溶解并稀释制成供试品溶液，所配制6分供试品溶液溶度相同。按照含量测定方法进行试验，测定供试品含量，结果表明本品平均含量为99.1%，RSD为1.4%，重复性试验较好。
取供试品，照含量测定方法进行试验，变动因素为人员、时间，考察含量测定结果变化情况。结果6次测定平均含量为99.2%，RSD为0.9%，中间精密度符合规定。
2.7 溶液稳定性试验
精密称取供试品适量，按照含量测定方法制备盐酸表柔比星供试品溶液，室温条件下放置放置8小时，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时及8小时进样。考察主峰峰面积变化，结果4小时内峰面积的RSD为0.5%，表明供试品溶液在室温条件下放置4小时内较稳定（6小时及8小时峰面积明显变化）。
上述方法学验证结果表明本品含量测定方法可行。
2.8 样品含量测定
取注射用盐酸表柔比星每批样品各10瓶，精密称定，用流动相溶解制成0.5mg/ml的溶液，按照所确定含量测定方法测定供试品含量，结果三批供试品含量分别为99.5%、101.4%、99.8%。理论塔板数大于12000，峰纯度监测结果表明峰纯度符合规定，系统适用性结果表明分离度符合规定。
3.讨论
本品含量测定关键为系统适用性考察，盐酸表柔比星与多柔比星不易分离，筛选流动相比例，使二者有效分离，同时进行峰纯度监测，对本品进行方法验证，结果表明所建立含量测定方法可行，操作简便，结果准确，重现性好，专属性强，可用于盐酸表柔比星制剂含量测定。
参考文献
[1] 邢来全，孙晓圆，张丽. HPLC测定注射用盐酸表柔比星的含量.食品与药品，2013年第15卷第3期：198-200.
[2] 李晓光；翟所迪；李珍；？杜亚薇；？张婷；？王彩利.3种注射用盐酸表柔比星溶液的稳定性考察. 中国药学杂志，2013年4月第48卷第8期：615-620.
[3] 张玫，殷璐.反相HPLC法测定注射用盐酸多柔比星含量及其有关物质. 药学进展，2000年第24卷第6期：355-358.
[4] 刘超；张萍.盐酸表柔比星药理作用及含量测定研究进展.北方要学，2014年第11卷第5期：72-73.
作者简介：
董海飞，哈药集团生物工程有限公司，质量检测中心化验员。