结核分支杆菌H37Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质的研究

• 作 者: 于海东 张雪莲 王宝林 雷建强 曹健 淳于利娟 许云敏 王洪
• 机 构: 复旦大学生命科学学院遗传学研究所,郑州工程学院生物工程系
• 出 处: 复旦学报：自然科学版
• 发表日期: 2004年2期
• 关键词: 结核分支杆菌H37Rv 莽草酸途径 莽草酸脱氢酶SD Mycobacterium tuberculosisH37Rv shikimate pathway s
• 基金项目: 国家基础研究 973基金 (2 0 0 2CB5 12 80 4 ) ,,国家自然科学基金资助项目 (30 2 70 0 72 ) ,,上海市科委研究项目(0 2DJ14 0 0 2 )

以结核分支杆菌H37Rv基因组为模板，扩增了该菌株的莽草酸脱氢酶基因aroE，通过在大肠杆菌BL21(DE3)pLYS中表达，纯化出可溶性的重组结核分支杆菌莽草酸脱氢酶(SD)．对其酶学性质测定分析表明：在辅酶NADPH作用下该酶可催化还原3-脱氢莽草酸生成莽草酸，最适pH值为11，最适温度为63℃，比活性8．26×10^4U／mg．Mg^2+，Ni^2+，Zn^2+等金属离子及NP40、TritonX-100等变性剂对其酶活有一定的促进作用，而SDS则强烈抑制该酶活性．应用圆二色仪初步测定了重