乙型肝炎患者外周血单个核细胞中乙肝病毒前S/S基因片段的检测

来源 :中华肝脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bamboo007
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1. 资料与方法:(1)研究对象:19例慢性乙型肝炎患者均符合1995年第6次全国病毒性肝炎会议诊断标准,为瑞金医院1998年门诊及住院患者,年龄12~46岁,平均32.79岁,女4例,男15例。同时收集PBMC和配对血清,并记录病程及ALT浓度。(2)分离PBMC及提取DNA:抽取肝素抗凝血7ml,用比重1.077的聚蔗糖-泛影葡胺液分离淋巴细胞,2500r/min,15min,吸出淋巴细胞,用HanKs液将细胞清洗5次,以去除可能残留的血浆DNA,分别收集第5次洗涤液(500μl)及细胞,提取PBMC DNA,DNA溶于500μl TE缓冲液。(3)血清及洗液中DNA的抽提:从500μl PBMC洗液及100μl血清中提取DNA后,分别溶于30μl及20μl TE缓冲液。
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