【摘 要】
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目的 构建GST-HDAC1融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法以质粒pcDNA3.1- HDAC1为模板进行PCR,通过EcoR1单酶切位点将HDAC1插入p GEX-5X-1中,构建原核表
【机 构】
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中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金;辽宁省自然科学基金
论文部分内容阅读
目的 构建GST-HDAC1融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法以质粒pcDNA3.1- HDAC1为模板进行PCR,通过EcoR1单酶切位点将HDAC1插入p GEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并转化点coli DH5 α,通过利用载体上的BamH1酶切位点和HDAC1上Nde1酶切位点来筛选阳性重组子,DNA序列测定正确后,转入化E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定.结果酶切后获得940bp片段为正向；如获得500bp片段为反向.重组质粒测序后与GenBank进行同源性比对证明导入片段为HDAC1,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-HDAC1,并用SDS-PAGE方法证实了GST-HDAC1融合蛋白在大肠杆菌中的表达.结论成功构建了HDAC1原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化HDAC1蛋白及与其它蛋白的关系奠定了基础.
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