【摘 要】
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目的 建立微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR, ddPCR)定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的分析方法.方法 选择基因hly A为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,优化
【机 构】
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山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,青岛,266001中国海洋大学食品科学与工程学院,青岛,266002;
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目的 建立微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR, ddPCR)定量检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的分析方法.方法 选择基因hly A为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,优化反应条件和反应体系, 通过细菌分离和 ddPCR方法对靶标基因的检测特异性、灵敏度和重复性进行实验, 并对定量结果进行分析.结果 ddPCR反应中的最佳探针浓度为5 pmol/μL, 特异性好, 检出限为(3.6±0.1) copies/20 μL, 重复性实验良好, 标准偏差为0.067%.ddPCR的拷贝数(copy number)与细菌密度(colony forming units, CFU/mL)形成了较好的线性关系.结论 本研究建立ddPCR的拷贝数和菌液密度或菌落数的线性关系, 可以为单核细胞增生李斯特氏菌的快速定量检测提供参考.
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