【摘 要】
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目的利用逆向点杂交技术建立丙型肝炎病毒(HCV)基因分型新方法.方法在HCV 5端非编码区(5UTR)设计引物与分型探针,将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上,制成HCV基因分
【机 构】
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广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所
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目的利用逆向点杂交技术建立丙型肝炎病毒(HCV)基因分型新方法.方法在HCV 5端非编码区(5UTR)设计引物与分型探针,将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上,制成HCV基因分型逆向点杂交检测膜条.分离纯化血清中的HCV RNA,经逆转录反应和生物素标记引物聚合酶链反应(PCR)巢式扩增后,将扩增产物与检测膜条杂交,过氧化物酶和四甲基联苯胺显色,判断基因分型结果.最后,通过与基因测序结果比较确定新方法的有效性.从佛山地区丙型肝炎患者中随机抽取60份经荧光定量PCR方法对HCV RNA进行过定量分析的血清,用新建方法进行HCV基因分型检测.结果新建HCV逆向点杂交基因分型方法可对所有60份HCV RNA拷贝数在102～106/ml之间的抽检血清进行基因分型,发现1b型50例,占83.3%;1a型2例,占3.3%;2a型2例,占3.3%;1a、1b混合型5例,占8.0%;1b、2a混合型1例,占1.7%;未发现2b、3a和3b型.新方法基因分型结果与测序分型结果一致.结论 PCR-逆向点杂交技术可以准确有效和简便经济地进行HCV基因分型,适用于临床检测与流行病学研究.在佛山地区人群中感染的HCV以1b型为主.
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