【摘 要】
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目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)、环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)在G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)减轻高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用机制.方法 将大鼠H9C2心肌细胞进行传代培养后分为对照组、高糖+高脂组、高糖+高脂+齐墩果酸组、干扰组(高糖+高脂+齐墩果酸+TGR5 shRNA)、Nrf2/HO-1组[高糖+高脂+齐墩果酸+Nrf2 siRNA病毒与HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理]、cAMP/PKA组[高糖+高脂+齐墩果酸+S
【机 构】
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阆中市人民医院,四川南充637400;西南医科大学附属医院,四川泸州646000
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目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)、环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)在G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)减轻高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用机制.方法 将大鼠H9C2心肌细胞进行传代培养后分为对照组、高糖+高脂组、高糖+高脂+齐墩果酸组、干扰组(高糖+高脂+齐墩果酸+TGR5 shRNA)、Nrf2/HO-1组[高糖+高脂+齐墩果酸+Nrf2 siRNA病毒与HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理]、cAMP/PKA组[高糖+高脂+齐墩果酸+SQ22536(cAMP抑制剂)预处理],荧光显微镜观察心肌细胞4\',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色结果,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组心肌细胞活性,采用活性氧荧光探针检测心肌细胞内活性氧(ROS)水平,应用图像分析法、BCA法分别测定各组心肌细胞表面积、蛋白含量,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组Nrf2、HO-1、PKA水平,以比色法测定肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,高效液相色谱法(HPLC)测定cAMP水平.结果 荧光显微镜显示,高糖+高脂组心肌细胞染色强度较对照组增加,而高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组大部分心肌细胞恢复正常,仅少许细胞被染成强蓝色,干扰组染色强度较高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组增加.与对照组比较,高糖+高脂组心肌细胞活性率下降,ROS水平及心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量增加,而高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组心肌细胞活性率高于高糖+高脂组,ROS水平及心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量低于高糖+高脂组,差异均有统计学意义(P<0.01);与高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组比较,干扰组心肌细胞活性率下降,ROS水平及心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量增加,差异均有统计学意义(P<0.01);高糖+高脂组Nrf2、HO-1、PKA、LDH、cAMP水平高于对照组,高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组Nrf2、HO-1、PKA、LDH、cAMP水平均低于高糖+高脂组,干扰组Nrf2、HO-1、PKA、LDH、cAMP水平均高于高糖+高脂+齐墩果酸组、Nrf2/HO-1组、cAMP/PKA组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 激活TGR5受体可能对高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤有保护作用,其信号转导机制可能与抑制Nrf2/HO-1、cAMP/PKA信号通路有关.
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