人内皮抑素在大肠杆菌中的高效表达及活性研究

• 作 者: 张革 柯细松 丁爱玲 银巍 杨琨 朱振宇
• 机 构: 中山医科大学分子医学中心,重庆医科大学生生化学教研室,郧阳医学院生物化学教研室
• 出 处: 中国病理生理杂志
• 发表日期: 2002年11期
• 关键词: 内皮抑素 大肠杆菌 抗体 生物学活性 PCR法 实体瘤 单克隆抗体 Endostatin Antibodies Biological activity

目的:表达人内皮抑素蛋白,制备多克隆抗体,检测其生物学活性.方法:采用PCR法扩增人内皮抑素基因,构建pGEX-ES融合表达载体,IPTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导表达.初步纯化的内皮抑素包含体蛋白制备兔多克隆抗体,Western-blot检测其在小鼠肝、肾等的表达.亲和纯化的内皮抑素蛋白用内皮细胞抑制实验检测其生物学活性.结果:诱导表达的人内皮抑素蛋白经凝血酶酶切后,分子量约为20 kD,具有抑制内皮细胞生长的活性.制备的多克隆抗体检测出内皮抑素在小鼠肝、肾等组织的表达.结论:人内皮抑素的成功表