研究经典活化型巨噬细胞(M1)对RA滑膜成纤维细胞(FLS)和对照组OA-FLS增殖的影响,为进一步研究巨噬细胞在RA疾病进展中的作用奠定基础。
方法采用脂多糖和IFN-γ体外诱导人单核细胞(THP-1)为M1,流式细胞术(FCM)检测M1表面特异性标志分子HLA-DR和CD197表达。transwell非接触式共培养M1和RA-FLS、OA-FLS,结晶紫染色法观察共培养48 h后RA-FLS、OA-FLS的增殖情况。MTS法检测M1分泌细胞因子对RA-FLS、OA-FLS增殖的影响。ELISA检测单独培养体系及共培养体系细胞培养上清中细胞因子TNF-α和IL-12的变化。采用配对t检验比较分析。
结果脂多糖和IFN-γ诱导THP-1为M1后,M1表面标记分子CD197和HLA-DR阳性率为78.25%和87.96%。RA-FLS、OA-FLS与M1共培养48 h后,RA-FLS、OA-FLS增殖受到明显抑制,共培养组显微镜下每视野RA-FLS、OA-FLS细胞数分别为(64±30)、(85±23),RA-FLS、OA-FLS单独培养组分别为(467±87)、(263± 78),差异有统计学意义(t=7.459, 3.791;P均<0.05)。M1与FLS共培养对RA-FLS、OA-FLS的增殖有明显抑制作用,差异有统计学意义(t=-7.155,-8.111;P均<0.05)。RA-FLS单独培养组和M1与RA-FLS共培养组培养上清中TNF-α的浓度分别是(0.024±0.011)ng/ml、(0.832±0.241)ng/ml,IL-12浓度分别为(0.033± 0.015)ng/ml、(0.372±0.122)ng/ml; OA-FLS单独培养组和M1与OA-FLS共培养组培养上清中TNF-α的浓度分别是(0.031±0.017)ng/ml、(0.854±0.323)ng/ml,IL-12浓度分别为(0.012±0.009)ng/ml、(0.373±0.144)ng/ml;共培养组TNF-α和IL-12浓度均明显升高,差异均有统计学意义(t=-4.997,-4.777,-4.407,-4.334;P均<0.05),RA组与OA组的结果一致。
结论M1与RA-FLS、OA-FLS共培养后,显著抑制RA-FLS、OA-FLS增殖,可能与共培养上清中TNF-α和IL-12的增加有关。