目的 研究中介体复合物亚基19(midiato complex subunit 19,Med19)基因沉默对人膀胱癌T24细胞株增殖和成瘤作用的影响. 方法 应用shRNA慢病毒载体感染T24人膀胱癌细胞沉默Med19基因,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测未感染组、阴性对照感染组以及shMed19感染组细胞的Med19基因表达情况；流式细胞仪分析各组细胞周期的变化；噻唑蓝(MTT)实验、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入实验、克隆形成实验评估肿瘤细胞增殖和生长能力；将T24细胞接种于裸鼠,进行小鼠成瘤实验,检测肿瘤细胞的致瘤能力. 结果 Med19-shRNA慢病毒感染T24细胞后,感染组Med19 mRNA表达相对含量为0.35 ±0.03,与未感染组0.75±0.07和阴性对照组1.00±0.07比较差异有统计学意义(P＜0.05)；感染组Med19蛋白表达量与未感染组和阴性对照组比较有明显差异；感染组G0/G1期细胞比例为(77.50±0.29)％,与未感染组(69.81±0.81)％和阴性对照组(67.53±0.67)％比较差异有统计学意义(P＜0.05)；MTT和BrdU实验表明感染组细胞存活数量和DNA合成较未感染组和阴性对照组显著降低(P＜0.05)；克隆形成实验中感染组克隆数量为(91.33±6.11)个,较未感染组(179.00±18.36)和阴性对照组(191.00±19.16)显著减少(P＜0.05)；小鼠成瘤实验中,24 d时感染组肿瘤体积为(596.64±485.36)mm3,质量为(0.57±0.44)g,与未感染组(2611.40±396.68) mm3和(1.94±0.60)g,阴性对照组(2463.21±1451.66) mm3和(2.17±1.75)g,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Med19基因沉默后人膀胱癌T24细胞的生长、增殖和成瘤能力均受到显著抑制,提示Med19基因在膀胱癌形成过程中具有重要作用.使用shRNA技术抑制Med19基因表达有望成为膀胱癌新的治疗手段之一。
中介体复合物亚基19基因沉默对人膀胱癌细胞增殖和成瘤影响的实验研究
【摘 要】
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目的 研究中介体复合物亚基19(midiato complex subunit 19,Med19)基因沉默对人膀胱癌T24细胞株增殖和成瘤作用的影响. 方法 应用shRNA慢病毒载体感染T24人膀胱癌细胞沉默Med19基因,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测未感染组、阴性对照感染组以及shMed19感染组细胞的Med19基因表达情况；流式细胞仪分析各组细胞周期的变化；噻唑蓝(MTT)实验、
【机 构】
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200040上海,复旦大学附属华山医院泌尿外科泌尿外科研究所,200040上海,复旦大学附属华山医院泌尿外科泌尿外科研究所,200040上海,复旦大学附属华山医院泌尿外科泌尿外科研究所,200040上
【出 处】
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中华泌尿外科杂志
【发表日期】
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2012年33期
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