芹菜甘露醇脱氢酶基因的分离与表达分析

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以芹菜(Apium graveolens L.)本芹品种‘六合黄心芹’和西芹品种‘文图拉’为研究对象,通过克隆测序,分别获得2种芹菜的甘露醇脱氢酶基因序列。2种芹菜来源的该基因全长均为1 098 bp,编码365个氨基酸,预测2种芹菜该酶蛋白质分子量分别为39.66 kD和39.69 kD,pI值分别为6.79和6.78。2种芹菜中甘露醇脱氢酶基因之间有17个核苷酸位点不同,3个氨基酸位点发生改变。通过与其他植物甘露醇脱氢酶基因与氨基酸序列比对,表明该基因具有高度的保守性。进化分析显示,与同属于伞形科的植物香芹进化关系最近。实时定量PCR表明,芹菜中甘露醇脱氢酶基因在根、茎、叶、花中表达有差异,其中根中含量最高。对2种芹菜分别进行4℃、38℃、0.2 mol·L-1NaCl和20%PEG处理7个不同时间段,实时定量表达分析显示,‘六合黄心芹’中甘露醇脱氢酶基因变化大于西芹‘文图拉’,且不同处理后甘露醇脱氢酶基因表达响应呈现出较大的差异。 Two kinds of celery mannitol dehydrogenase gene sequences were obtained by cloning and sequencing of the celery (Apium graveolens L.) celery cultivar ’Liuhe Huangxinqin’ and celery variety ’Ventura’. The two celery-derived genes were all 1 098 bp, encoding a protein of 365 amino acids. The predicted molecular weights of the two celery cultivars were 39.66 kD and 39.69 kD, respectively, with pI values ​​of 6.79 and 6.78, respectively. There are 17 nucleotide differences between the dehydrogenase genes and 3 amino acid changes. By comparing with other plant mannitol dehydrogenase gene and amino acid sequence, the gene was highly conserved. Phylogenetic analysis showed that the evolution of the genus Parsley, which belongs to the family Umbelliferae, has been the most recent. Real-time quantitative PCR showed that the expression of mannitol dehydrogenase gene in root, stem, leaf and flower of celery was the highest, among which the content of root was the highest. The results of real-time quantitative analysis showed that the change of mannitol dehydrogenase gene was more than that of celery in ’Liuhe Huangxinqin’, when the two kinds of celery were respectively treated at 4 ℃, 38 ℃, 0.2 mol·L-1 NaCl and 20% PEG for 7 different time periods, ’Ventura’, and mannitol dehydrogenase gene expression response showed a greater difference after different treatments.
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