观察内质网应激/蛋白激酶样内质网激酶(PERK)/DNA损伤诱导因子153(CHOP)通路在七氟烷致新生大鼠海马神经细胞凋亡中的作用。
方法(1)按照海马神经元暴露在3%七氟烷不同时间长度分为4组：对照组(Control组)、七氟烷暴露1 h组(Sev1组)、七氟烷暴露3 h组(Sev2组)、七氟烷暴露6 h组(Sev3组)，用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组海马神经元凋亡蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)以及内质网应激蛋白PERK、CHOP的蛋白表达；(2)将海马神经元分为4组：对照组(Control组)、七氟烷暴露6 h组(Sev组)、加入内质网应激特异性抑制剂牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)100 μmol/L并暴露于3%七氟烷6 h组(Sev＋T组)以及加入TUDCA 500 μmol/L暴露于3%七氟烷6 h组(Sev＋HT组)。采用Western blot的方法评估各组细胞凋亡蛋白Caspase-12、bax的表达。(3)将海马神经元分为5组：对照组(Control组)、暴露于3%七氟烷6 h组(Sev组)，经PERK小干扰RNA(siRNA)转染并暴露于3%七氟烷6 h组(PERK siRNA)，经CHOP siRNA转染并暴露于3%七氟烷6 h组(CHOP siRNA)，以及加入TUDCA 100 μmol/L并暴露于3%七氟烷6 h组(TUDCA组)。利用Western blot的方法对比分别加入内质网应激特异性抑制剂TUDCA、PERK siRNA、CHOP siRNA后凋亡蛋白Caspase-12、bax的表达。应用SPSS 20.0统计软件分析，组间比较采用单因素方差分析。
结果(1)海马神经元暴露在3%七氟烷3 h及6 h后均出现亡蛋白Caspase-12、bax以及内质网应激蛋白PERK、CHOP的蛋白表达的上调(3组bax表达分别是1.00±0.00、3.20±0.42、4.10±0.51，F＝76.450，Caspase-12表达分别是1.00±0.00、3.30±0.34、5.20±0.41，F＝214.500；PERK表达分别是1.00±0.00、3.20±0.31、5.10±0.29，F＝307.800；CHOP表达分别是1.00±0.00、2.80±0.31、4.90±0.33，F＝247.800，P<0.05)；(2)七氟烷引起的细胞凋亡加入不同浓度内质网应激特异性抑制剂TUDCA后，细胞凋亡蛋白Caspase-12、bax较之前下调(Caspase-12：5.20±0.41、3.90±0.35、2.30±0.13，F＝315.500；bax：4.10±0.51、3.70±0.29、2.20±0.21，F＝38.760；P<0.05)，且高浓度TUDCA下调细胞凋亡表现更明显(Caspase-12：5.20±0.41比2.30±0.13，bax：4.10±0.51比2.20±0.21，P<0.05)；(3)PERK抑制剂PERK siRNA、CHOP抑制剂CHOP siRNA均可不同程度地下调Caspase-12、bax凋亡蛋白的表达。Sev、PERK siRNA、CHOP siRNA 3组bax分别是4.10±0.51、2.90±0.32、3.50±0.23，F＝12.470，Caspase-12分别是：5.20±0.41、3.60±0.11、2.90±0.36，F＝61.030，P<0.05。
结论内质网应激在七氟烷致海马神经细胞凋亡中起着重要的作用，抑制内质网应激可以抑制七氟烷引起的海马神经元凋亡。