【摘 要】
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利用鸟枪法从甲基对硫磷降解菌DLL 1Peudomonasputida)中克隆了甲基对硫磷水解酶基因 (mpd)片段2 5kb ,并进行了测序。通过软件分析开放阅读框和启动子序列 ,表明该序列中最
【机 构】
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南京农业大学生命科学学院微生物学系; 南京农业大学生命科学学院微生物学系 农业部农业环境微生物工程重点开放实验室; 南京210095; 农业部农业环境微生物工程重点开放实
【基金项目】
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国家 8 63 ( 2 0 0 1AA2 14 12 1,2 0 0 2AA2 460 81);农业科技跨越计划 (M2 0 0 0 11);国家攻关 ( 2 0 0 2BA5 16A0 1)项目资助~~
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利用鸟枪法从甲基对硫磷降解菌DLL 1Peudomonasputida)中克隆了甲基对硫磷水解酶基因 (mpd)片段2 5kb ,并进行了测序。通过软件分析开放阅读框和启动子序列 ,表明该序列中最可能为甲基对硫磷水解酶结构基因的阅读框为 76 9～ 1 794区域。软件分析还表明该水解酶前端 4 5个氨基酸为典型的信号肽结构。通过PCR扩增了mpd结构基因 ,亚克隆到表达载体pET 32a中 ,构建了完整的融合表达载体pET MP。转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,在IPTG的诱导下 2～ 4h甲基对硫磷水解酶表达可以达到最高水平 ;同时还研究了乳糖的诱导效果 ,2 %乳糖诱导 2h就可以起到很好的效果。通过PCR反应验证了mpd基因定位于DLL E4的染色体而不是质粒上
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