【摘 要】
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目的：构建带Flag标签的自噬相关基因5（ATG5）的真核表达载体,获得Flag-ATG5融合蛋白。方法：以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG5编码序列,将其插入pc DNA3-Flag载体,转染人
【机 构】
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解放军总医院第一附属医院,军事医学科学院生物工程研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金（81472589,31100604）, 北京市科技新星计划（Z141102001814055）, 北京市自然科学基金（7132155）, 军事医学科学院创新基金转化医学项目（ZHYX003）
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目的：构建带Flag标签的自噬相关基因5（ATG5）的真核表达载体,获得Flag-ATG5融合蛋白。方法：以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG5编码序列,将其插入pc DNA3-Flag载体,转染人胚肾293T细胞后,Western印迹检测其表达情况;将该重组质粒与ATG12表达质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀法检测2个蛋白的相互作用。结果：Flag-ATG5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约33×103;Flag-ATG5可与Myc-AT
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