【摘 要】
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试验旨在探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对LPS诱导的鸡巨噬细胞(HD11)炎症模型的抗炎效果和作用机制.用不同浓度的LPS刺激鸡巨噬细胞(HD11),通过CCK8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA表达的变化,以确定构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度.将HD11分为对照组(C)、脂多糖(LPS)组(L)、黄芪多糖(APS)组(A)和黄芪多糖抑制脂多糖组(A+L),在LPS刺激后的2、6、12、24、48 h用实时荧光定
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院,黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室,哈尔滨150030;东北农业大学动物医学学院,黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室,哈尔滨150030;苏州华测技术有限公司,苏州215
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试验旨在探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对LPS诱导的鸡巨噬细胞(HD11)炎症模型的抗炎效果和作用机制.用不同浓度的LPS刺激鸡巨噬细胞(HD11),通过CCK8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA表达的变化,以确定构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度.将HD11分为对照组(C)、脂多糖(LPS)组(L)、黄芪多糖(APS)组(A)和黄芪多糖抑制脂多糖组(A+L),在LPS刺激后的2、6、12、24、48 h用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子(NF-κBp65)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3) mRNA表达的变化,Western blotting法检测NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3蛋白含量变化,ELISA检测IL-1β和TNF-α蛋白含量变化.细胞活力和IL-1β检测结果表明,构建细胞炎症模型的LPS最适添加浓度为0.5μ g/mL.实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,L和A组IL-1β、TNF-α、NF-κBp65、p38MAPK和SOCS3 mRNA表达均显著升高(P＜0.05);与L组相比,A+L组在LPS刺激后的IL-1β、TNF-α、 NF-κBp65和p38MAPK mRNA表达含量均显著降低(P＜0.05),SOCS3 mRNA表达显著增加(P＜0.05).Western blotting结果表明,与对照组相比,A组P-NF-κBp65/NF-κBp65、P-p38MAPK/p38MAPK和SOCS3/α-tubulin比值均显著增加(P＜0.05);与L组相比,A+L组P-NF-κBp65/NF-κBp65和P-p38MAPK/p38MAPK比值均显著降低(P＜0.05);A+L组SOCS3/α-tubulin比值显著升高(P＜0.05).ELISA结果表明,与对照组相比,L组IL-1β和TNF-α蛋白含量在2～48 h均显著增加(P＜0.05);与L组相比,A+L组IL-1β和TNF-α的蛋白含量在LPS刺激后12～48 h均显著降低(P＜0.05).以上结果表明,在LPS诱导的HD11细胞炎症模型中,APS通过促进SOCS3的表达抑制NF-κBp65和p38MAPK信号通路的过度活化,从而发挥抗炎作用.
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