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（内蒙古医科大学第一附属医院病理科内蒙古 呼和浩特 010000）摘要： 为了规范病理石蜡切片的制作，为了提高病理诊断的准确性减少漏诊和误诊的发生，对病理技术操作规范化的重要性及石蜡切片HE染色的细节之处做了探讨。
关键词：规范操作：石蜡切片：HE染色
【中图分类号】R19【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0373-01在病理技术领域，病理技术是病理诊断中不可分割的一部分，同时，也是教学和科研不可缺少的环节。十几年来病理技术有了较大的改进，新仪器的问世使工作中减少了一些繁琐的手工操作，新技术应用提高了病理诊断的准确性。尽管如此，最常规、最重要、最基础的仍然是石蜡切片、HE染色。因为制片的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的诊断，所以规范操作是保证石蜡切片、HE染色的前提。因此结合自己多年来的经验谈谈操作规范重要性。
1 组织脱水、石蜡切片、HE染色的标准
1.1 组织脱水后包埋优质蜡块的标准 无凹陷、无气泡、组织要在一个平面无斜坡和缺损。
1.2 高质量切片的标准 平整，无刀痕、褶皱、裂纹、折叠、破碎、掉片，切片要薄、捞片位正，无气泡。
1.3 高质量HE染色片的标准 结构清晰，色彩鲜艳，无污染，封片无气泡。
2 制作高质量HE染色的步骤
2.1 组织的固定：新鲜的组织经过适当的固定尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分形态。因组织细胞内含有多种酶，当细胞缺氧时细胞内的蛋白分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞，导致的自溶。所以手术切除的组织标本一定要及时固定。组织固定时，应使用足量的固定液。用于组织固定的液体很多，通常大多数病理科都采10%甲醛固定液，因甲醛易氧化成甲酸属偏酸性，故我室采用中性甲醛。它固定效果好，即适合普通HE染色，又能满足免疫组化和特殊染色的需要。
2.2 组织的取材：病理医师的取材也是至关重要的一环，取材质量的好坏直接影响到切片质量，过大过厚组织脱水不透、浸蜡不彻底而影响制片质量，过小过薄经脱水会卷曲。再取大标本时一定要把组织表面的黏液及血液清洗掉，取淋巴结时要把周围脂肪组织剔掉。切取组织块一般面积为1.5cm×1.5cm，厚度不超3mm。切面须尽量平整。如系骨组织或钙化物质，先行脱钙处理。
2.3 组织脱水和透明：组织经过固定之后含有大量水分，而水与石蜡不溶，在进行石蜡包埋前，必须将组织内的所有水分脱去，脱水剂选用酒精，由低浓度逐级到高浓度进行脱水，组织脱水后进二甲苯进行透明，因为二甲苯即溶于酒精又溶于石蜡还能使组织透明，是一种检验组织脱水是否彻底的手段，因此，按时更换脱水剂及透明剂。
2.4 组织的浸蜡和包埋：石蜡要求质地纯净溶点稍低（56～58）度的石蜡。组织浸蜡一般以三缸依次进行，浸蜡时间依组织大小薄厚而定，一般2～3小时为宜，浸蜡时间不可过长或过短，过长易造成组织脆硬，切片破碎。过短难以制成完好的切片。包埋机石蜡温度要比组织高（约3-6度），否则易造成组织与周围石蜡脱裂现象，而达不到包埋作用，包埋的关键一是平整，二是方位。包埋常采用组织最大面，囊壁、官腔要竖直，小的颗粒组织应尽量放在一起，并在一个平面上。包埋时还应留意有无缝线、钙化，如有一定要剔除。
2.5 石蜡切片、展片及贴片
2.5.1 切片前首先要调整好刀的角度，粗切至组织全部暴露出来后，再进行细切，使组织表面均匀一致。切的蜡片要与组织块的大小一致，切片厚度应为3～5μm，对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体，切片的厚度应为2～3μm。对钙化组织，一定要选用固定刀口，以减少其它部位出现缺口的现象。保证切片刀其他部位的锋利，才能切出良好的蜡片，
2.5.2 展片、捞片：切出的蜡片应放在恒温的展片槽内，槽内温度（39～42）度，水温的高低与包埋蜡熔点有关，水温过高，会引起组织细胞散开，水温过低，切片皱褶无法展开。捞取切片要选用完整、无划痕、薄厚均匀的蜡片摊于水面，用镊子轻轻展开贴附在载玻片上。因脑组织和骨组织容易掉片，最好选用防脱胶片。将捞取的切片置于（80～85）度烤片箱内，约需（15～20）分钟。烤片之后进行脱蜡，脱蜡也很重要，如脱蜡不尽，切片不易着色或模糊不清，因此，要经常更换脱蜡二甲苯。
2.6 染色 HE染色的关键在于深浅适度，对比鲜明，染色试剂的好坏决定着染色效果。苏木素染色时间要根据染液的新旧、温度切片类型而定，一般5～10分钟。因此，关键的步骤在于苏木素染好后的分化和返蓝过程，在返蓝结束后，应在显微镜下观察细胞核着色是否合适，核结构是否清楚，胞浆内是否有残留的苏木素。染色理想的切片在显微镜下是，细胞核与细胞浆应蓝红相映，
鲜明艳丽，便于观察检验。
2.6.1 苏木素的配制
2.6.2 染色步骤
2.6.3 染色原理及注意事项 首先是溶媒剂的选择，染剂的浓度。当石蜡切片烤好后进入二甲苯以脱去切片中的石蜡，各级酒精脱去切片中的二甲苯，然后，入水清洗要彻底，再进苏木素，细胞核染色时间的长短要根据染剂对组织的染色作用，室温条件，切片薄厚，固定液類别，染液的新旧来调整染色时间。用（0.5%～1%）盐酸酒精分化，分化步骤掌握的好坏液，也是染色成败的关键，如分化失当，自然会引起染色不均，过淡或过深等现象。为了保证细胞核染色的清晰。染色和分化的时间要灵活掌握。
3 讨论
常规病理技术工作是病理诊断工作的基石[1]，病理诊断的发展离不开病理技术的提高，一张高质量的切片涵盖了病理科全体工作人员的心血。因此，标本从接收、固定、取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片每一环节都很重要，所以高质量HE染片过程，是一环扣一环，任何一个环节不按规范去操作，最终都会影响染片的质量[2]。要制作高质量HE切片就必须严格规范操作，同时在工作中要善于总结、摸索，我们的工作才能做到让自己满意，让病理医生满意[3]。
参考文献
[1] 上海第一医学院病理解剖教研组编病理检验技术[M ]上海科学技术出版社
[2] 司明远基层医院如何制备优质病理切片[J]临床与实验病理学杂志2012、28（2）：222
[3] 刘增辉主编病理染色技术[M]人民卫生出版社
关键词：规范操作：石蜡切片：HE染色
【中图分类号】R19【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0373-01在病理技术领域，病理技术是病理诊断中不可分割的一部分，同时，也是教学和科研不可缺少的环节。十几年来病理技术有了较大的改进，新仪器的问世使工作中减少了一些繁琐的手工操作，新技术应用提高了病理诊断的准确性。尽管如此，最常规、最重要、最基础的仍然是石蜡切片、HE染色。因为制片的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的诊断，所以规范操作是保证石蜡切片、HE染色的前提。因此结合自己多年来的经验谈谈操作规范重要性。
1 组织脱水、石蜡切片、HE染色的标准
1.1 组织脱水后包埋优质蜡块的标准 无凹陷、无气泡、组织要在一个平面无斜坡和缺损。
1.2 高质量切片的标准 平整，无刀痕、褶皱、裂纹、折叠、破碎、掉片，切片要薄、捞片位正，无气泡。
1.3 高质量HE染色片的标准 结构清晰，色彩鲜艳，无污染，封片无气泡。
2 制作高质量HE染色的步骤
2.1 组织的固定：新鲜的组织经过适当的固定尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分形态。因组织细胞内含有多种酶，当细胞缺氧时细胞内的蛋白分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞，导致的自溶。所以手术切除的组织标本一定要及时固定。组织固定时，应使用足量的固定液。用于组织固定的液体很多，通常大多数病理科都采10%甲醛固定液，因甲醛易氧化成甲酸属偏酸性，故我室采用中性甲醛。它固定效果好，即适合普通HE染色，又能满足免疫组化和特殊染色的需要。
2.2 组织的取材：病理医师的取材也是至关重要的一环，取材质量的好坏直接影响到切片质量，过大过厚组织脱水不透、浸蜡不彻底而影响制片质量，过小过薄经脱水会卷曲。再取大标本时一定要把组织表面的黏液及血液清洗掉，取淋巴结时要把周围脂肪组织剔掉。切取组织块一般面积为1.5cm×1.5cm，厚度不超3mm。切面须尽量平整。如系骨组织或钙化物质，先行脱钙处理。
2.3 组织脱水和透明：组织经过固定之后含有大量水分，而水与石蜡不溶，在进行石蜡包埋前，必须将组织内的所有水分脱去，脱水剂选用酒精，由低浓度逐级到高浓度进行脱水，组织脱水后进二甲苯进行透明，因为二甲苯即溶于酒精又溶于石蜡还能使组织透明，是一种检验组织脱水是否彻底的手段，因此，按时更换脱水剂及透明剂。
2.4 组织的浸蜡和包埋：石蜡要求质地纯净溶点稍低（56～58）度的石蜡。组织浸蜡一般以三缸依次进行，浸蜡时间依组织大小薄厚而定，一般2～3小时为宜，浸蜡时间不可过长或过短，过长易造成组织脆硬，切片破碎。过短难以制成完好的切片。包埋机石蜡温度要比组织高（约3-6度），否则易造成组织与周围石蜡脱裂现象，而达不到包埋作用，包埋的关键一是平整，二是方位。包埋常采用组织最大面，囊壁、官腔要竖直，小的颗粒组织应尽量放在一起，并在一个平面上。包埋时还应留意有无缝线、钙化，如有一定要剔除。
2.5 石蜡切片、展片及贴片
2.5.1 切片前首先要调整好刀的角度，粗切至组织全部暴露出来后，再进行细切，使组织表面均匀一致。切的蜡片要与组织块的大小一致，切片厚度应为3～5μm，对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体，切片的厚度应为2～3μm。对钙化组织，一定要选用固定刀口，以减少其它部位出现缺口的现象。保证切片刀其他部位的锋利，才能切出良好的蜡片，
2.5.2 展片、捞片：切出的蜡片应放在恒温的展片槽内，槽内温度（39～42）度，水温的高低与包埋蜡熔点有关，水温过高，会引起组织细胞散开，水温过低，切片皱褶无法展开。捞取切片要选用完整、无划痕、薄厚均匀的蜡片摊于水面，用镊子轻轻展开贴附在载玻片上。因脑组织和骨组织容易掉片，最好选用防脱胶片。将捞取的切片置于（80～85）度烤片箱内，约需（15～20）分钟。烤片之后进行脱蜡，脱蜡也很重要，如脱蜡不尽，切片不易着色或模糊不清，因此，要经常更换脱蜡二甲苯。
2.6 染色 HE染色的关键在于深浅适度，对比鲜明，染色试剂的好坏决定着染色效果。苏木素染色时间要根据染液的新旧、温度切片类型而定，一般5～10分钟。因此，关键的步骤在于苏木素染好后的分化和返蓝过程，在返蓝结束后，应在显微镜下观察细胞核着色是否合适，核结构是否清楚，胞浆内是否有残留的苏木素。染色理想的切片在显微镜下是，细胞核与细胞浆应蓝红相映，
鲜明艳丽，便于观察检验。
2.6.1 苏木素的配制
2.6.2 染色步骤
2.6.3 染色原理及注意事项 首先是溶媒剂的选择，染剂的浓度。当石蜡切片烤好后进入二甲苯以脱去切片中的石蜡，各级酒精脱去切片中的二甲苯，然后，入水清洗要彻底，再进苏木素，细胞核染色时间的长短要根据染剂对组织的染色作用，室温条件，切片薄厚，固定液類别，染液的新旧来调整染色时间。用（0.5%～1%）盐酸酒精分化，分化步骤掌握的好坏液，也是染色成败的关键，如分化失当，自然会引起染色不均，过淡或过深等现象。为了保证细胞核染色的清晰。染色和分化的时间要灵活掌握。
3 讨论
常规病理技术工作是病理诊断工作的基石[1]，病理诊断的发展离不开病理技术的提高，一张高质量的切片涵盖了病理科全体工作人员的心血。因此，标本从接收、固定、取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片每一环节都很重要，所以高质量HE染片过程，是一环扣一环，任何一个环节不按规范去操作，最终都会影响染片的质量[2]。要制作高质量HE切片就必须严格规范操作，同时在工作中要善于总结、摸索，我们的工作才能做到让自己满意，让病理医生满意[3]。
参考文献
[1] 上海第一医学院病理解剖教研组编病理检验技术[M ]上海科学技术出版社
[2] 司明远基层医院如何制备优质病理切片[J]临床与实验病理学杂志2012、28（2）：222
[3] 刘增辉主编病理染色技术[M]人民卫生出版社