猪传染性胃肠炎病毒南京株纤突S蛋白基因的克隆与序列分析

• 作 者: 张素芳 何孔旺 贾云 倪艳秀 华荣虹 赵玉军
• 机 构: 江苏农科院农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室,沈阳农业大学
• 出 处: 动物医学进展
• 发表日期: 2003年3期
• 关键词: 猪 传染性胃肠炎 病毒 南京株 纤突S蛋白基因 基因克隆 序列分析 Transmissible gastroenteritis virus spike pro

参考Genbank收录的TGEV-Miller 株的基因序列,自行设计合成1对引物(TGEVP5/P6),对不同代次的TGEV疫苗弱毒STC3及种毒Ⅰ、种毒Ⅱ进行了RT-PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,均出现1条大约1 262 bp 的目的条带, 经 EcoRⅡ酶切,都产生了871 bp和391 bp左右的两个片段,与预期大小相符. 将种毒Ⅱ RT-PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18-T载体中,转化宿主菌DH5α,挑选阳性克隆(命名为PTs),提取重组质粒,用HpaⅠ、 EcoRⅠ对重组质