目的表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(recombinant human collagen type Ⅱ peptide 250-270,rhCⅡ250-270)并研究其对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和关节滑液单个核细胞(SFMC)中特异性T细胞的活化作用. 方法利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ250-270多聚基因的表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli BL21,融合表达目的蛋白,经Glutathione Sepharose○R 4B亲和层析柱分离纯化,12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量(Mr)和纯度.以不同浓度(0.1、1.0、10、100、1000μg/ml)的6聚rhCⅡ2 50-270和化学合成的CⅡ250-270刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照,流式细胞仪测定刺激前后2组培养细胞中T细胞CD69的表达率,以分析其对特异性T细胞的活化作用. 结果融合表达的目的产物经SDS-PAGE分析,相对分子质量(Mr)大小约为43×103,与预期相符.分离纯化的6聚rhCⅡ250-270经SDS-PAGE凝胶薄层扫描,纯度为89%,浓度为2.1mg/ml.FACS分析:经100μg/ml浓度的6×rhCⅡ250-270刺激3d后,RA(9例)患者PBMC和SFMC T细胞中CD69+细胞率分别为(18.05±4.34)%和(25.17±4.89)%,显著高于同型对照GST组水平[(1.02±0.48)%,(1.25±0.23)%,(P＜0.01)],而与化学合成的CⅡ250-270组无统计学差异.进一步分析表明,同组患者滑液中CD69的表达显著高于外周血(P＜0.01). 结论纯化的6聚rhCⅡ250-270多肽经初步验证具有活化RA患者特异性T细胞的特性.
重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究
【摘 要】
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目的表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(recombinant human collagen type Ⅱ peptide 250-270,rhCⅡ250-270)并研究其对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和关节滑液单个核细胞(SFMC)中特异性T细胞的活化作用. 方法利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程
【机 构】
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第四军医大学西京医院临床免疫科,西安市第五人民医院风湿科
【出 处】
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中华微生物学和免疫学杂志
【发表日期】
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2003年23期
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