【摘 要】
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目的 构建非标准化尖吻蝮（五步蛇，Agkistrodon acutus）毒腺cDNA文库，随机挑取克隆测序，分析金属蛋白酶基因。方法 以Tnzd试剂提取新鲜尖吻蝮毒腺总RNA，以superscript Ⅱ反转录酶合
【机 构】
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中山大学中山医学院药理学教研室,中国科学院北京基因组研究所,中山大学中山医学院生物化学教研室
【基金项目】
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广东省重点科研基金资助项目（2003BA109015）
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目的 构建非标准化尖吻蝮（五步蛇，Agkistrodon acutus）毒腺cDNA文库，随机挑取克隆测序，分析金属蛋白酶基因。方法 以Tnzd试剂提取新鲜尖吻蝮毒腺总RNA，以superscript Ⅱ反转录酶合成cDNA第一链并以DNA聚合酶Ⅰ连续合成第二链。双链DNA经过含EcoRⅠ酶切位点接头加接，末端磷酸化并以XhoⅠ内切酶酶切，按照〈0．25kb，0．25-0．5kb，0．5-1kb，1-2kb和〉2kb5个片段大小分别回收，随后与pBluescriptⅡSK（＋）载体相连转化E.coli D
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