【摘 要】
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目的探讨miR-181a在高强度聚焦超声(high-intensity focused ultrasound,HIFU)增强机体抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法 1皮下构建供HIFU治疗的黑色素瘤移植瘤小鼠模型,采
【机 构】
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重庆医科大学检验医学院,重庆医科大学生物医学工程学院,
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目的探讨miR-181a在高强度聚焦超声(high-intensity focused ultrasound,HIFU)增强机体抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法 1皮下构建供HIFU治疗的黑色素瘤移植瘤小鼠模型,采用简单随机法随机分为HIFU组与荷瘤组,每组30只,采用MTT方法检测各组脾淋巴细胞对B16细胞的杀伤活性,ELISA检测小鼠血清及共培养上清中TNF-α及IFN-γ的表达水平;2qRT-PCR检测HIFU组与荷瘤组脾淋巴细胞中的差异miRNAs;3用生物信息学方法预测差异miRNAs的潜在靶基因,通过RT-PCR及Western blot验证靶基因的表达;4构建荧光素酶报告质粒进一步验证差异miRNAs的靶基因,再将差异miRNAs的mimics转染脾淋巴细胞,RT-PCR及Western blot检测其靶基因表达的变化,以进一步确认差异miRNAs对靶基因表达的影响。结果 1HIFU治疗能够抑制黑色素瘤生长,促进脾淋巴细胞分泌TNF-α和IFN-γ,增强脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性;2HIFU处理明显下调脾淋巴细胞中miR-181a的表达水平(P<0.01);3生物信息学方法预测发现共刺激分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)可能是miR-181a的潜在靶基因,且HIFU处理明显促进脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA和蛋白质的表达(P<0.01);4miR-181a mimics显著抑制pLUC-ICAM-1-3’UTR报告质粒荧光素酶的活性(P<0.01),并下调脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达(P<0.01)。结论 HIFU通过抑制miR-181a对共刺激分子ICAM-1的负调控作用从而增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫。
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