【摘 要】
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为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控,根据犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)的基因特征,建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重
【基金项目】
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江苏出入境检验检局科研立项(2012KJ03)
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为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控,根据犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)的基因特征,建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重PCR方法。对GenBank中登录的21株CDV和17株CCV的野毒株、疫苗株基因组全序列进行比对分析,分别针对H蛋白和S蛋白编码区各设计了1对特异引物,分别扩增出大小为550和225bp的目的片段。回收目的片段插入到pMD18-T载体中进行测序鉴定,分别提取阳性质粒制备阳性标准DNA。通过优化试验条件,建立了检测CDV和CCV的双重PCR方法并对其进行灵敏度、特异性和临床验证。该双重PCR方法能特异的扩增CDV和CCV,且敏感性均达到0.1ng/μL总核酸量。与胶体金试纸条方法对比检测67份临床样品,符合率较高,CDV达到92.5%,CCV达到94%。
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