shRNA表达载体的构建及对HBV复制和表达的抑制

• 作 者: 张宏斌 武婕 郑文岭 马文丽 冼江 谢闻悦 李薇 王捷
• 机 构: 广州军区广州总医院医学实验科,广东,广州,510010南方医科大学基因工程研究所,广东,广州,510515
• 出 处: 细胞与分子免疫学杂志
• 发表日期: 2007年10期
• 关键词: 表达载体 HBV shRNA 乙型肝炎病毒 启动子 质粒 真核表达载体 U6启动子 表达质粒 介导转染

目的:构建shRNA的表达载体,检测针对乙型肝炎病毒(HBV)的shRNA的稳定表达质粒对HBV复制和表达的影响.方法:扩增U6启动子构建shRNA表达载体pU6.针对HBV基因组序列设计并化学合成双链核苷酸克隆到pU6载体得到质粒pU6B/HBVi,脂质体介导转染带有HBV基因组的2.2.15细胞,定量PCR和ELISA法检测pU6B/HBVi对HBV复制和表达的影响.结果:成功构建了shRNA的真核表达载体;针对HBV的pU6B/HBVi质粒对HBV的复制和表达有明显的抑制作用.结论:稳定表达shRNA的pU6B/HBVi质粒可以抑制HBV在2.2.15细胞中的复制和表达.