类风湿关节炎患者Ⅱ型胶原蛋白cDNA基因的克隆及序列分析

• 作 者: 王安宇 魏良纲 乔艺杰 张超 张定安 何光志
• 机 构: 贵阳中医学院第二附属医院,贵阳中医学院基础医学院
• 出 处: 山东医药
• 发表日期: 2012年42期
• 关键词: 类风湿关节炎 Ⅱ型胶原蛋白cDNA 基因克隆 基因序列 rheumatoid arthritis cDNA of type Ⅱ collagen gene c

目的克隆人Ⅱ型胶原蛋白cDNA（hCⅡcDNA）基因。方法以类风湿关节炎患者关节软骨组织的RNA为模板，采用RT—PCR技术扩增hCⅡcDNA基因，将扩增产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，在LB培养基中培养12～16h，挑取菌落并接种于LB培养液中，取2μL菌液为模板进行PCR鉴定，PCR结果呈现特异性条带为hCⅡcDNA阳性。对hCⅡcDNA阳性的克隆菌株进行测序。结果克隆基因经测序并通过NCBI BLAST分析后发现，其与Genebank中公布的编码人Ⅱ型胶原蛋白的基因序列