【摘 要】
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目的构建绿色荧光蛋白/PAP-a融合表达载体,并检则其在肝癌细胞SMMC-7721细胞中的表达.方法采用PCR方法获得PAP-a基因;将该基因片段克隆入带有绿色荧光蛋白(green fluorescent
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院传染科,郑州大学第一附属医院感染科
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目的构建绿色荧光蛋白/PAP-a融合表达载体,并检则其在肝癌细胞SMMC-7721细胞中的表达.方法采用PCR方法获得PAP-a基因;将该基因片段克隆入带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,CFP)报告基因的真核表达载体pEGP-N1中,构建融合表达载体pEGFP-PAPa;通过脂质体介导的方法将该载体转染到SMMC-7721中,Western blot检测PAP-a的瞬时表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达.结果pEGFP-PAPa转染SMMC-7721细胞后,在细胞中检测到PAP-a基因片段,Western blot可以检测到PAP-a在SMMC-7721细胞表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论 pEGFP-PAPa在SMMC-7721细胞中获得了表达,表达的融合蛋白具有PAPa和绿色光蛋白的双重活性,该载体的成功表达是研究PAP-a抗肿瘤或抗病毒活民生的基础.
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