【摘 要】
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目的:检测甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)基因在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响,并初步探讨其作用机制.方法:免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测骨肉瘤组织与癌旁组织中METTL3表达水平;RNA干扰技术抑制人骨肉瘤MG63细胞中METTL3表达,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测METTL3 mRNA和蛋白表达水平来检测抑制效果;CCK-8法和Annexin V-FITC双
【机 构】
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恩施土家族苗族自治州中心医院,湖北 恩施 445000;武汉大学基础医学院,湖北 武汉 430071
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目的:检测甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)基因在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响,并初步探讨其作用机制.方法:免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测骨肉瘤组织与癌旁组织中METTL3表达水平;RNA干扰技术抑制人骨肉瘤MG63细胞中METTL3表达,qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测METTL3 mRNA和蛋白表达水平来检测抑制效果;CCK-8法和Annexin V-FITC双染法分别检测细胞增殖活性与凋亡情况;碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测细胞成骨分化作用;Western blot检测骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)蛋白表达水平,以及PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达水平.结果:骨肉瘤组织中METTL3表达较癌旁组织明显升高(P<0.05),抑制MG63细胞中METTL3表达后,细胞活性显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),成骨诱导MG63细胞后碱性磷酸酶染色和茜素红染色阳性增加,钙盐结节明显增多,OCN、OPN、RUNX2蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),PI3K、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05).结论:METTL3在骨肉瘤组织中高表达,下调METTL3表达可抑制人骨肉瘤细胞增殖,促进凋亡与成骨分化,这一作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关.
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