【摘 要】
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目的建立自人外周血淋巴细胞(PBMCs)中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞(如浆细胞)的体外活化方法，为抗体药物研发提供研究基础。方法采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者(Z和L)外周血，分离PBMCs，通过白细胞介素(IL)-2、IL-4和Toll样受体诱导剂(CpG、R848)体外诱导活化记忆B细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中总抗体和HBsAg特异
【机 构】
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目的建立自人外周血淋巴细胞(PBMCs)中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞(如浆细胞)的体外活化方法，为抗体药物研发提供研究基础。
方法采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者(Z和L)外周血，分离PBMCs，通过白细胞介素(IL)-2、IL-4和Toll样受体诱导剂(CpG、R848)体外诱导活化记忆B细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中总抗体和HBsAg特异性抗体的含量；通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测培养细胞中总抗体分泌细胞(ASC)数量的变化和HBsAg特异性抗体细胞数量。
结果活化第6天，对照组和两个活化组[CpG DNA 2006联合IL-2(C组)和R848联合IL-2(R组)]细胞培养上清总免疫球蛋白(Ig)G浓度分别为37.06 ng/mL、80.87 ng/mL和85.97 ng/mL，两个活化组(C组和R组)均明显高于对照组(t＝23.318，60.639，P均<0.05)。ELISPOT检测ASC数量，结果显示，C组和R组数量均多于对照组，并且R组明显多于C组。两种活化方法均能在体外诱导B细胞活化，但R组活化效果更佳，确立R组为最佳活化方法。用该方法活化两名乙型肝炎疫苗接种者PBMCs，ELISA检测活化组特异性抗体浓度，R组显著高于对照组(t＝5.031，11.561，P均<0.05)。不同细胞数量诱导的分组，ELISPOT检测HBsAg特异性抗体分泌细胞数量，R组均明显多于对照组。
结论确立诱导剂R848和细胞因子IL-2联合能够有效地诱导外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞，为今后抗体药物研发提供了研究基础。
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